上海N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物药物开发

蛋白质的N-糖基化特征是一个关键的质量属性。它会影响生物制药的安全性和有效性，因此需要在开发和生产过程中进行表征和监测。常见的聚糖分析工作流程是用PNGase F释放N-聚糖，然后用荧光标记物（如2-AB、2-AA、普鲁卡因胺或RapiFluor-MS™（沃特世公司））标记生成的聚糖。然后使用HILIC-HPLC或毛细管电泳分离标记的聚糖，以表征和定量不同的聚糖结构。 在这里，使用游离聚糖方法分析zhiliao性抗体曲妥珠单抗、Fc-融合蛋白依那西普和糖蛋白RNase B的N-聚糖。曲妥珠单抗和依那西普在天然条件下在37°C下用Genvois的PNGase F去糖基化1小时，而RNase B需要变性和还原才能完全去糖基化。因此，在50°C下用PNGase F去糖基化10分钟之前，用RapiGest™ SF表面活性剂（沃特世公司）和TCEP处理RNase B。 用RapiFluor-MS标记所得游离的聚糖，并通过HILIC UPLC-FLD-MS进行分析。FucosEXO 可在 1 至 2 小时内水解糖蛋白上的末端 α1-2,3,4 。上海N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物药物开发

与PNGase F类似，Genvois的OmniGLYZOR用于携带N-和简单O-糖的糖蛋白的去糖基化。 OmniGLYZOR 试剂盒包括：OmniGlyZOR 微离心柱；PNGase F 冻干；RapiGest™* SF表面活性剂。除非底物蛋白变性，否则某些 N-糖基化位点很难或无法被 PNGase F 接近。在OmniGLYZOR Microspin柱上孵育后剩余的N-糖可以在变性条件下使用试剂盒中包含的PNGase F冻干和RapiGest™ SF表面活性剂通过额外的去糖基化步骤去除。使用Genovis的OpeRAT对EPO进行O-糖位点特异性消化：对于jin携带一个或几个 O-糖基化位点的简单底物蛋白，OpeRATOR 也可用于绘制中间水平的 O-糖基化位点。 冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶糖生物学研究PNGase F去除N-糖，被用于MS分析的样品制备，以降低蛋白质的异质性，分析游离的糖，并研究N-糖的功能作用。

水解O-聚糖的酶不会从变性中获益，这就是为什么OmniGLYZOR色谱柱只能在天然条件下使用的原因。 OmniGLYZOR 试剂盒 Microspin 以含有足够材料的试剂盒形式提供，可使5 × 50-100 μg 或 10 × 50-100 μg 糖蛋白去糖酸化。N-和O-连接聚糖的快速高效；与LC-MS兼容；完全去除聚糖，改进基础蛋白的分析；固定形式可提高酶与底物的比率，从而实现快速去糖基化。 IgdE酶(FabALACTICA®)和PNGaseF酶分别购自Genovis(马萨诸塞州，美国)。用于水解糖蛋白上N-聚糖的冻干酶。Genovis的PNGase F 冻干剂以冻干粉的形式提供，装在 1000 或 5 x 1000 单位小瓶中，分别用于消化 1 mg 或 5 x 1 mg 糖蛋白。

经过多年的经验积累及市场积淀，倍笃生物已组合多条不同产品线，分别满足体外诊断、organoid及干细胞、细胞基因药物等领域的需求。其中，细胞基因药物领域产品线包含SAN HQ高盐核酸酶及M-SAN HQ中盐核酸酶、泊洛沙姆P 188 Bio、GMP级MSC/PSC培养基、GMP级胶原酶、AAV滴度检测产品、工艺杂质及外源污染物残留检测产品、聚糖分析用酶、ADC偶联技术、QED抗体对、AAV中和抗体、蛋白酶等；相关品牌有挪威ArcticZymes Technologies、德国BASF、德国Sartorius、德国Nordmark、瑞典Genovis、美国QED、中国君研生物等。在天然条件下使用OmniGLYZOR Microspin色谱柱，可在3小时内有效去除C1 抑制剂O-聚糖。

由于蛋白质的O-糖模式的异质性和O-糖结构的OpeRATOR特异性，形成了重叠的肽，从而可以获得O-糖位点的完整图谱为了进行比较，相同材料的标准胰蛋白酶消化物， 显示难以分析的少量且非常大的糖肽。使用Genovis的OpeRATOR进行O-糖位点定位：OpeRATOR 是一种 O-聚糖特异性蛋白酶，可消化丝氨酸和苏氨酸糖基化位点的粘蛋白型 O-糖蛋白 N 端。这会产生携带O-糖的糖肽，并能够使用质谱法进行O-糖分析、O-糖肽图谱以及中级分析。下面是OpeRATOR消解位点的示意图。GlycOCATCH的应用包括O糖蛋白和肽的特异性富集或去除、糖组学、复杂样品的研究和生物制药的表征。四川冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶

GalNAcEXO 在 pH 值 6.0 至 7.6 范围内具有高度活性，来源于Akkermansia muciniphila。上海N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物药物开发

与PNGase F类似，Genvois的OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物，可快速有效地去除抗体、融合蛋白和其他糖基化蛋白上的 N 和简单的粘蛋白型 O-聚糖。聚糖的去除被用于减少异质性，以促进蛋白质的分析，例如质谱法。去糖基化也可用于研究聚糖的功能作用。N-和粘蛋白型O-连接聚糖的快速高效去糖基化；即用型离心柱形式 - 无酶干扰分析；与LC-MS兼容。与PNGase F类似，Genvois的与PNGase F类似，Genvois的OmniGLYZOR 含有去除 N-糖和最常见的粘蛋白型 O-糖所需的酶，即单唾液酸和二唾液酸he心 1 和 Tn 抗原 （α-GalNAc）。OmniGLYZOR Microspin 小柱中包含以下组分：PNGase F；O-糖苷酶。上海N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物药物开发