辽宁N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

OglyZOR 来源于口腔链球菌，在大肠杆菌中表达。该酶含有 His 标签，分子量为 227 kDa。SialEXO来源于Akkermansia muciniphila，在大肠杆菌中表达。SialEXO酶含有His标签，组分的分子量分别为42 kDa和66 kDa。1.高效O-糖苷酶；2. 降低样品异质性，揭示潜在的关键蛋白质修饰；3. 完全、稳健地去除 O-糖he心 1 二糖。Genovis的冻干酶，用于水解糖蛋白上的he心1 O-聚糖。OglyZOR 冻干剂以冻干粉的形式提供，装在 2000 个单位的小瓶中，用于在 2 mg 糖蛋白上水解he心 1 O-聚糖。它需要去除唾液酸助剂才能发挥作用，因此与2000单位的SialEXO冻干一起提供。FucoseEXO固定在离心柱中，可快速方便地处理高达0.5mg的糖蛋白，然后在离心步骤中轻松收集消化的糖蛋白。辽宁N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

我们展示了使用两种蛋白作为底物的OmniGLYZOR的性能。依那西普是一种 Fc 融合蛋白，含有 TNFα 受体的胞外结构域。该结构域用 2 个 N-糖和 8-11 个 1 个具有不同程度唾液酸化的 O-聚糖修饰。在 37°C 下将这种重糖基化蛋白在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小时，可完全去除所有 N-和 O-糖，如中级 LC-MS 分析所示。促红xibao生成素 （EPO） 是一种携带 3 个 N-聚糖和 1 个he心 1 个 O-聚糖的小蛋白质，其总质量的近 40% 由聚糖组成。O-连接聚糖通常存在于蛋白质的暴露位置，因为它们在蛋白质折叠发生后附着。只有负责其合成的糖基转移酶才能接触到这些暴露的位点。安徽PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究水解ɑ2-3-连接唾液酸的冻干酶SialEXO 2-3，装在500个单位的小瓶中，用于0.5mg糖蛋白的去唾液酸化。

我们测量了FucosEXO从一组dai表不同键的不同寡糖底物中释放的岩藻糖。FucosEXO可有效释放α1-2、α1-3和α1-4连接的岩藻糖，对α1-6连接的岩藻糖残基没有活Genovis的FucosEXO的底物特异性：岩藻糖以不同的键存在于N-和O-聚糖上。α1-2、α1-3 和 α1-4 连接的岩藻糖常见于 O-聚糖中，并作为 N-聚糖的天线岩藻糖基化，而 α1-6 连接的岩藻糖被发现是 N-聚糖he心的修饰。β1-3,4半乳糖的水解：Genovis的GalactEXO 是一种β-半乳糖苷酶混合物，可水解 N-和 O-糖基化蛋白中的 β1-3,4-连接末端半乳糖。

与PNGase F类似，Genvois的OmniGLYZOR 水解 N-和粘蛋白型 O-聚糖：糖基化往往是异质的，这使得对高度糖基化的生物zhiliao药物的分析具有挑战性。完整质量数的确认以及其他产品质量属性的表征受到不同糖型复杂性的阻碍，这就是为什么有效的聚糖去除工具简化了此类分析的原因。 虽然 N-聚糖包含一个共同的结构，并且可以通过 PNGase F 整体去除，但粘蛋白型 O-聚糖在结构上更加多样化，具有多个不同的he心。OmniGLYZOR含有固定化酶的混合物，能够依次分解O-聚糖，以完全去除最常见的O-聚糖结构（二唾液酸和单唾液酸基he心1和Tn抗原）。OglyZOR 是一种内切糖苷酶，可特异性水解天然糖蛋白上的he心 1 O-聚糖；

由于蛋白质的O-糖模式的异质性和O-糖结构的OpeRATOR特异性，形成了重叠的肽，从而可以获得O-糖位点的完整图谱为了进行比较，相同材料的标准胰蛋白酶消化物， 显示难以分析的少量且非常大的糖肽。使用Genovis的OpeRATOR进行O-糖位点定位：OpeRATOR 是一种 O-聚糖特异性蛋白酶，可消化丝氨酸和苏氨酸糖基化位点的粘蛋白型 O-糖蛋白 N 端。这会产生携带O-糖的糖肽，并能够使用质谱法进行O-糖分析、O-糖肽图谱以及中级分析。下面是OpeRATOR消解位点的示意图。OpeRATOR 是一种 O-聚糖特异性蛋白酶，可消化携带he心 1 O-聚糖的蛋白质，糖基化（he心 1）Ser 和 Thr 残基的 N 端。海南冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶

人血清中 O-糖蛋白的富集：GlycOCATCH还可用于从复杂的样品混合物（如人血清）中选择性富集O-糖基化蛋白。辽宁N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

当在完整状态下进行分析时，EPO的聚糖异质性导致了非常复杂的质谱图。通过在 37°C 下在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小时，可以有效地去除 N 糖（含有PNGase F酶）和 O-糖，如对应于未修饰蛋白质的单个峰所示。EPO上残留了少量用乙酰化唾液酸修饰的O-聚糖，因为OmniGLYZOR对这种结构的水解效率低下。根据制造商Genvois的建议（在37°C下进行O/N孵育），两种底物蛋白也用另一种市售的去糖基化产物处理，并显示数据以供比较。另一方面，N-聚糖在内质网中翻译地连接到未折叠的蛋白质上。这导致某些 N-糖基化位点难以被 Genovis的PNGase F 接近，或者一旦底物蛋白折叠成其天然状态，就根本无法接近。因此，这种N-聚糖的水解需要底物蛋白以与酶活性相容的方式变性。辽宁N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis