青海高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

上海倍笃生物科技有限公司（简称“倍笃生物”），由中国科学院及生物医药产业界人士，于2018年1月共同创立。公司代理多个品牌的仪器、试剂及耗材（如Genovis的IdeS酶），遵守相关法规要求，如cGMP规范、ISO13485质量管理体系认证等，致力于为诊断领域如分子诊断及病原微生物检测研发等，药物研发领域如细胞基因药物、核酸药物、抗体药物、干细胞及外泌体研究等客户提供合规、高质量物料及专业服务，以期与客户共同协作，加快研发及生产进度，为客户提供更多价值。OpeRATOR 冻干剂以冻干粉末的形式提供，装在 2000 个单位的小瓶中；青海高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

当在完整状态下进行分析时，EPO的聚糖异质性导致了非常复杂的质谱图。通过在 37°C 下在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小时，可以有效地去除 N 糖（含有PNGase F酶）和 O-糖，如对应于未修饰蛋白质的单个峰所示。EPO上残留了少量用乙酰化唾液酸修饰的O-聚糖，因为OmniGLYZOR对这种结构的水解效率低下。根据制造商Genvois的建议（在37°C下进行O/N孵育），两种底物蛋白也用另一种市售的去糖基化产物处理，并显示数据以供比较。另一方面，N-聚糖在内质网中翻译地连接到未折叠的蛋白质上。这导致某些 N-糖基化位点难以被 Genovis的PNGase F 接近，或者一旦底物蛋白折叠成其天然状态，就根本无法接近。因此，这种N-聚糖的水解需要底物蛋白以与酶活性相容的方式变性。重庆N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究OmniGLYZOR 水解 N-和粘蛋白型 O-聚糖。

Genovis的SialEXO产品是用于去除和分析唾液酸的唾液酸酶。这些酶对天然糖蛋白或游离的聚糖结构上存在的 N- 和 O-连接聚糖均具有活性。SialEXO用于在用OpeRATOR或OglyZOR消化之前预处理O-糖基化蛋白。其他应用包括降低样品复杂性、电荷异构体分析和外切糖苷酶阵列。N-连接、O-连接和游离聚糖的高效去唾液酸化快速去除唾液酸，增强对蛋白质电荷变体的分析可固定在即用型离心柱中。然后可以用FabRICATOR消化所得的去糖基化蛋白，并通过中级质谱分析。我们将该工作流程应用于依那西普的分析，虽然未经处理的TNFR结构域过于复杂而无法分析，但O-聚糖组成可以在用PNGase F处理后进行分离和比较。

Genovis的OglyZOR 是一种内切糖苷酶（O-糖苷酶），可特异性水解天然糖蛋白上的he心 1 O-聚糖。OglyZOR 用于去除 O-糖，用于糖分析、确认 O-糖的存在和降低样品的异质性。Genovis的OglyZOR 是一种内切糖苷酶（内切-α-N-乙酰半乳糖氨酸酶），可催化来自天然糖蛋白的he心 1 和有限程度的he心 3 O-聚糖的水解。 OglyZOR酶活性需要去除唾液酸，因此，由唾液酸酶混合物组成的唾液酸冻干，用于去除α2-3，α2-6和α2-8连接的唾液酸，与OglyZOR一起提供。在pH 6.5至7.5和37°C下获得良好活性。固定形式可提高酶与底物的比率，快速去糖基化。

我们展示了使用两种蛋白作为底物的OmniGLYZOR的性能。依那西普是一种 Fc 融合蛋白，含有 TNFα 受体的胞外结构域。该结构域用 2 个 N-糖和 8-11 个 1 个具有不同程度唾液酸化的 O-聚糖修饰。在 37°C 下将这种重糖基化蛋白在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小时，可完全去除所有 N-和 O-糖，如中级 LC-MS 分析所示。促红xibao生成素 （EPO） 是一种携带 3 个 N-聚糖和 1 个he心 1 个 O-聚糖的小蛋白质，其总质量的近 40% 由聚糖组成。O-连接聚糖通常存在于蛋白质的暴露位置，因为它们在蛋白质折叠发生后附着。只有负责其合成的糖基转移酶才能接触到这些暴露的位点。使用 GalactEXO 冻干和 GalactEXO 固定化都可以看到向 G0F 糖型的转变。江西PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究

OmniGLYZOR Microspin 小柱中包含以下组分：PNGase F；O-糖苷酶。青海高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

与PNGase F类似，Genvois的OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物，可快速有效地去除抗体、融合蛋白和其他糖基化蛋白上的 N 和简单的粘蛋白型 O-聚糖。聚糖的去除被用于减少异质性，以促进蛋白质的分析，例如质谱法。去糖基化也可用于研究聚糖的功能作用。N-和粘蛋白型O-连接聚糖的快速高效去糖基化；即用型离心柱形式 - 无酶干扰分析；与LC-MS兼容。与PNGase F类似，Genvois的与PNGase F类似，Genvois的OmniGLYZOR 含有去除 N-糖和最常见的粘蛋白型 O-糖所需的酶，即单唾液酸和二唾液酸he心 1 和 Tn 抗原 （α-GalNAc）。OmniGLYZOR Microspin 小柱中包含以下组分：PNGase F；O-糖苷酶。青海高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis