荧光定量 PCR 仪是一种通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,对 PCR 产物进行标记跟踪,实时监测反应过程的仪器。工作原理:在 PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个 PCR 进程。随着 PCR 扩增的进行,每经过一个循环,荧光信号就会相应增加。通过检测荧光信号的变化,就可以判断 DNA 的扩增情况,进而实现对初始模板的定量分析。常用的荧光化学物质有 TaqMan 荧光探针和 SYBR 荧光染料等。TaqMan 探针法中,探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR 扩增时,Taq 酶的 5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号。SYBR Green Ⅰ 法中,SYBR 荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的 SYBR 染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。而荧光探测器则能够准确地捕捉到这些微弱的荧光信号,并将其转化为电信号或数字信号进行分析。泰州HEX荧光定量PCR仪价格实惠

荧光染料法原理:一些荧光染料(如 SYBR Green I)能特异性地结合到双链 DNA 上。在 PCR 反应体系中,随着 DNA 扩增产物的不断增加,与双链 DNA 结合的荧光染料也越来越多,荧光信号强度与 PCR 产物的数量呈正相关。通过检测荧光信号的强度变化,就可以实时监测 PCR 反应的进程。过程:在 PCR 反应的每一个循环中,当温度降低到退火温度时,引物与模板结合,DNA 聚合酶开始延伸引物,合成新的 DNA 链。此时,荧光染料会结合到新合成的双链 DNA 上,仪器会在特定的时间点检测荧光信号的强度。随着循环次数的增加,荧光信号逐渐增强,当信号强度达到设定的阈值时,对应的循环数被称为阈值循环数(Ct 值)。定量依据:在一定的范围内,起始模板量与 Ct 值呈对数关系。即起始模板量越多,达到阈值所需的循环数越少,Ct 值越小;反之,起始模板量越少,Ct 值越大。通过已知浓度的标准品建立标准曲线,再根据待测样本的 Ct 值,就可以在标准曲线上计算出其对应的起始模板量。苏州HEX荧光定量PCR仪价格实惠激发光源能够稳定且有效地激发 TET 荧光染料,使其发出足够强的荧光信号。

VIC与 FAM 类似,是一种荧光报告基团,可标记在引物或探针上用于荧光定量 PCR。它在 PCR 过程中,随着引物或探针与目标 DNA 的结合以及 PCR 产物的扩增,会发出特定波长的荧光,其荧光信号强度与 PCR 产物的量成正比,通过检测荧光信号的变化来实现对目标 DNA 的定量分析。特点:激发波长和发射波长与 FAM 有所不同,激发波长约为 538nm,发射波长约为 554nm,荧光颜色为黄绿色。VIC 常用于多重荧光定量 PCR 中,可与 FAM 等其他荧光染料同时使用,实现对多个不同目标基因的同时检测,因为其光谱特性与其他染料有较好的区分度,能避免荧光信号之间的相互干扰。
多重荧光定量 PCR:在同一反应体系中同时检测多个目标基因时,VIC 荧光染料可与其他不同发射波长的荧光染料(如 FAM、ROX 等)组合使用。由于 VIC 的光谱特性与其他染料有较好的区分度,能避免荧光信号之间的相互干扰,从而实现对多个不同目标基因的同时定量分析。例如,在疾病诊断中,可同时检测多个与疾病相关的基因标志物,提高诊断的准确性和全面性。SNP 基因分型:在单核苷酸多态性(SNP)检测中,通过设计特定的引物和探针,利用 VIC 荧光染料标记不同等位基因的探针。在 PCR 反应过程中,根据不同等位基因与探针的特异性结合,产生不同的荧光信号,从而实现对 SNP 位点的分型。这种方法具有较高的准确性和灵敏度,可用于疾病关联研究、药物遗传学研究以及个体遗传特征分析等领域。而荧光定量 PCR 技术可以在数小时内得出结果,提高了诊断效率。

技术创新推动:纳米荧光探针商业化落地,如量子点荧光标记技术使检测灵敏度大幅提升,推动相关设备在疾控中心的采购量增长。多模态检测平台兴起,荧光 — 质谱联用系统在早筛领域的应用,成为三甲医院设备更新的优先选项。智能化设备占比将不断提升,2025 年智能化设备占比预计将突破 40%,AI 驱动的全流程自动化可将检测时间大幅压缩,误差率也更低。市场竞争加剧:2023 年 PCR 仪市场占有率排名的品牌合计占有 70.73% 的市场份额,而 2019 年合计占有率为 94.5%,市场集中度变低,大量新玩家涌入,市场竞争变得更加激烈。各厂家不断创造新的产品形态,开辟新的应用领域,以争取更大的市场份额。先进的数据处理算法能去除噪声、校正漂移,精确分析荧光信号变化,提高检测灵敏度。徐州CY3荧光定量PCR仪询问报价
TET 并不是一种特定品牌或型号的荧光定量 PCR 仪,而是一种荧光染料的名称。泰州HEX荧光定量PCR仪价格实惠
荧光定量PCR仪具有高灵敏度、高特异性和精确定量等特点,被广泛应用于多个行业,以下是一些主要的应用行业:生命科学研究行业基因表达分析:是研究基因表达调控的重要工具,可精确测定不同组织、不同发育阶段以及不同生理病理条件下基因的表达水平,有助于深入了解基因的功能和生物过程的分子机制。基因功能研究:通过对基因敲除、过表达或 RNA 干扰等模型中相关基因表达量的定量分析,验证基因的功能,揭示基因之间的相互作用关系。分子进化研究:分析不同物种或同一物种不同个体之间基因泰州HEX荧光定量PCR仪价格实惠