医学实验外包之chip-seq检测,ChIP-Seq是研究体内蛋白与DNA互作的重要技术。该技术先用甲醛等试剂交联固定细胞内的“蛋白-DNA”复合物,裂解并超声处理细胞,用目的蛋白特异的抗体(或标签抗体)做免疫沉淀,获取“目的蛋白-DNA”的复合物,去交联分离复合物中的DNA做高通量测序,即可找到可能与目的蛋白互作的DNA序列。交付产物1.原始结果图(包括Input和洗脱液的SDS-PAGE图)2.高通量测序结果3.完整实验报告(包括实验材料、方法、结果分析)代做实验,医学实验外包,实验样本检测。四川结果客观的医学实验外包外包
医学实验外包,明星分子选得好,文章分数才能高,中游节点**常选,上下连接左右逢源。明星分子的概念大而且含糊,尽管通路是一个大的网络,但是总体上上下游关系还是存在的,如果简单来划分可以分为上游,中游和下游三段,三者之间没有严格的界限,一般的通路常常出现分子类型有:配体与受体,激酶/磷酸酶(去/泛素化酶)与底物,转录因子和靶基因等,以TGFβ-Smad通路为例,如果把细胞膜和核膜作为上中下分类的区分点,可以粗略的这么划分和标注:那么在这个通路里面什么分子是明星分子呢?一般来说,大家选的重点集中在中游这个范围内,下游的分子(比如图中的p15)一般用来作为细胞表型(细胞周期)的证据,可能考虑到膜蛋白研究的复杂和困难性,大家也很少选择上游的分子,所以中游的分子就成了明星分子选择的重点了,特别是通路的名字叫做TGFβ-Smad,所以很多研究就是围绕Smad这个蛋白展开,比如Smad这个家族的蛋白即是转录因子,可以通过结合靶基因的DNA调控分子表达,其本身又可以被磷酸化发挥功能,所以又是激酶-底物这一关系中的底物这一角色,因此激酶-Smad-磷酸化的Smad(转录因子)-靶基因就成了一个信号轴。四川结果客观的医学实验外包外包南京医学实验外包公司,糖尿病医学模型。
医学实验外包,circRNA Pulldown(环状RNA)介绍:使用生物素RNA探针,与细胞裂解液孵育,形成探针-circRNA-蛋白质复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合,从而与裂解液中的其他成分分离。磁珠复合物洗脱后,可通过western blot实验或质谱实验检测特定的circRNA结合蛋白是否与circRNA相互作用。RNA pull-down实验就是先将RNA进行标记(如生物素探针标记),再与细胞裂解液共同孵育,从而形成RNA-蛋白质复合物,之后再分离复合物得到蛋白质,通过western blot 或mass Spectrometry检测蛋白质的技术。目前RNA pull-down技术已成为研究miRNA、lncRNA与相互作用蛋白的主要技术手段之一。
医学实验外包,对于很多实验室的老师来说,有些实验难度大,或者是缺乏相应的条件,把实验外包出去,这都是可以理解的。医学实验的一般研究思路,比如发现一个基因在某**细胞系中表达下调,下一步若做机制研究首先,确认是蛋白质水平的下调还是mRNA水平的下调,可以通过westernblot和realtimeRT-PCR来初步确认一下。如果是mRNA水平上就出现下调,那么比较有可能的是这个基因是受这个***的某个信号通路或者是转录因子调控,从而影响它的转录。具体是哪条通路或者是哪几条通路就要多看看paper还有做实验来看了。如果是mRNA水平没有影响,只影响蛋白质水平,那么有可能是蛋白质翻译后修饰或者是蛋白质降解引起的,也是多看看分析一下有可能的降解或者是修饰的途径。另外你再查查有没有这个蛋白与其他蛋白的相互作用研究,可以大致预测是哪条通路。如果没有人做过你就发达了~~还有可以看看你研究的**中是否有发现类似的报道。有个病理上模型的支撑就更加好了。医学实验外包,基础机制研究好帮手。
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医学实验外包,wb检测,要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,优先方法是westernBlot。因为WesternBlot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然,顺利的时候WesternBlot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟,作为一种有活性的生物大分子,抗体和抗原的反应毕竟不象1+1那么明确,而用这种不确定的试剂来测定同样知之甚少的表达产物,确实是有一定的不确定性的。所以,严谨的WesternBlot实验设计中要求有良好的参照体系,对实验结果分析是非常有用。特别是当实验出现问题时,借助参照体系很容易就可以查出问题所在,而不必抓耳挠腮怨天尤人。良好的参照体系通常包括分子量marker(用来确定蛋白条带对应的分子量大小),空白载体对照(如果是诱导表达体系还应该有诱导前的对照),已知量标准产物的正对照;另外还有内参。四川结果客观的医学实验外包外包
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