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扫描电镜实验方法原理1. 生物样品的精细结构易遭破坏。因此在进行制样处理和进行电镜观察前必需进行固定。以使其能较为大限度地保持其生活时的形态。而采用水溶性、低表面张力的有机溶液如乙醇等对样品进行梯度脱水，也是为了在对样品进行干燥处理时尽量减少由表面张力引起的其自然形态的变化。 2. 目前采用较为多、效果较为好的方法是临界点干燥法。其原理是在一装有溶液的密闭容器中，随着温度的升高，蒸发速率加快，气相密度增加。液相密度下降。当温度增调到某一定值时，气、液二相密度相等，界面消失，表面张力也就不存在了。此时的温度及压力即称为临界点。将生物样品用临界点较低的物质置换出内部的脱水剂进行干燥，可以完全消除表面张力对样品结构的破坏。 目前用得较为多的置换剂是二氧化碳。由于二氧化碳与乙醇的互溶性不好，因此样品经乙醇分级脱水后还需用与这两种物质都能互溶的「媒介液」醋酸戊脂置换乙醇。扫描电镜是一种多功能的仪器、具有很多优越的性能、是用途较为广的一种仪器。四川整体扫描电镜服务

较为常见的扫描电子显微镜模式是检测由电子束激发的原子发射的二次电子（secondary electron）。可以检测的二次电子的数量，取决于样品测绘学形貌，以及取决于其他因素。通过扫描样品并使用特殊检测器收集被发射的二次电子，创建了显示表面的形貌的图像。它还可能产生样品表面的高分辨率图像，且图像呈三维，鉴定样品的表面结构。扫描电子显微镜由三大部分组成：真空系统，电子束系统以及成像系统。真空系统主要包括真空泵和真空柱两部分。真空柱是一个密封的柱形容器。四川整体扫描电镜服务扫描电镜观察厚试样：其在观察厚试样时，能得到高的分辨率和比较真实的形貌。

扫描电镜样本处理：新鲜取材后用2.5%戊二醛固定液固定样本，4℃过夜放置，倒掉2.5%戊二醛固定液，用0.1M，pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次，每次15min；用1%的锇酸溶液固定样品1-2h；小心取出锇酸废液，用0.1M，pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次，每次15min；用梯度浓度（包括30%，50%，70%，80%，90%和95%五种浓度）的乙醇溶液对样品进行脱水处理，每种浓度处理15min，再用100%的乙醇处理两次，每次20 min。用乙醇与醋酸异戊酯的混合液（V/V=1/1）处理样品30min，再用纯醋酸异戊酯处理样品1h或放置过夜。临界点干燥。镀膜，观察。处理好的样品在扫描电镜中观察。

扫描电镜以观察样品的表面形态为主。扫描电镜样品的制备，必须满足以下要求： 　　①保持完好的组织和细胞形态; 　　②充分暴露欲观察的部位; 　　③良好的导电性和较高的二次电子产额; 　　④保持充分干燥的状态。 　　某些含水量低且不易变形的生物材料，可以不经固定和干燥而在较低加速电压下直接观察，如动物毛发、昆虫、植物种子、花粉等，但图像质量差，而且观察和拍摄照片时须尽可能迅速。对大多数的生物材料，则应首先采用化学或物理方法固定、脱水和干燥，然后喷镀碳与金属以提高材料的导电性和二次电子产额。扫描电镜生物样品制备技术 常规扫描电镜对样品要求:必须是干燥的，不含水分或挥发性物质;具有一定机械强度,能耐受电子束轰击；具有导电性，被激发时能够产生足够的二次电子。生物材料特点:含水分多，质地柔软，机械强度小;组成元素的原子序数低，导电性差,激发后二次电子的产额较少。制样的任务:通过一系列处理,既要尽量完美地保存材料的固有形态，又要改良其物理性能，使其适合在电镜下观察成像 以下即为步骤方法、所需注意项目、以及操作中的使用技巧。由于扫描电镜入射电子与样品之间的相互作用，各个方向发射的二次电子收集起来。

扫描电子显微镜的制造是依据电子与物质的相互作用。当一束高能的入射电子轰击物质表面时，被激发的区域将产生二次电子、俄歇电子、特征x射线和连续谱X射线、背散射电子、透射电子，以及在可见、紫外、红外光区域产生的电磁辐射。同时，也可产生电子-空穴对、晶格振动（声子）、电子振荡（等离子体）。原则上讲，利用电子和物质的相互作用，可以获取被测样品本身的各种物理、化学性质的信息，如形貌、组成、晶体结构、电子结构和内部电场或磁场等等。扫描电子显微镜正是根据上述不同信息产生的机理，采用不同的信息检测器，使选择检测得以实现。如对二次电子、背散射电子的采集，可得到有关物质微观形貌的信息；对X射线的采集，可得到物质化学成分的信息。 扫描电子显微镜除了观察表面形貌外,还能进行成分和元素的分析,以及通过电子通道花样进行结晶学分析,。四川整体扫描电镜服务

扫描电子显微镜正是根据上述不同信息产生的机理，采用不同的信息检测器，使选择检测得以实现。四川整体扫描电镜服务

扫描电镜照片是灰度图像，分为二次电子像和背散射电子像，主要用于表面微观形貌观察或者表面元素分布观察。 一般二次电子像主要反映样品表面微观形貌，基本和自然光反映的形貌一致，特殊情况需要对比分析。 背散射电子像主要反映样品表面元素分布情况，越亮的区域，原子序数越高。 2、看表面形貌，电子成像，亮的区域高，暗的区域低。非常薄的薄膜，背散射电子会造成假像。导电性差时，电子积聚也会造成假像。扫描电镜是一种多功能的仪器，具有制样简单、放大倍数可调范围宽、图像的分辨率高、景深大等特点。数十年来，扫描电镜已普遍地应用在生物学、医学、冶金学等学科的领域中。它可以观察纳米粒子的形貌、在基体中的分散情况以及粒径的测量、材料断口分析、镀层表面形貌分析和深度检测、微区化学成分分析及显微组织及超微尺寸材料的研究等分析应用。四川整体扫描电镜服务

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