湖南值得信赖的外泌体提取

 外泌体是一类由细胞分泌的病毒大小的膜状囊泡，它们携带有蛋白质与核酸，调节着胞内的沟通。目前较常用的外泌体提取方法是differential centrifugation (DC)——差速离心法。也有用试剂盒提取外泌体，但效率均不高。聚乙二醇（PEG）用于浓缩和纯化病毒已经超过50年，因为外泌体与病毒有着较为相似的生物物理特性，因此作者考虑用聚乙二醇来纯化外泌体，并且给出了新的浓缩提纯外泌体的方法。是一种直径约30~100nm的双层膜囊泡状结构小体，可由机体内多种细胞如免疫细胞、干细胞、心血管细胞、网织红细胞南京实验医学平台一站式外泌体检测服务平台。湖南值得信赖的外泌体提取

外泌体鉴定透射电镜观察能够确认外泌体的形态学特征，但无法体现样本中所有外泌体颗粒的粒径分布情况及整体浓度；流式细胞仪可测定的粒径大小为150nm以上，并不适合检测游离的外泌体颗粒。英瀚斯生物采用基于马尔文Nanosight平台的纳米颗粒追踪分析 (Nanoparticle Tracking Analysis, NTA) 技术，快速、精细地分析外泌体粒径分布浓度，为外泌体存在提供有力证据。目前外泌体的提取方法主要可归纳为以下六种:一是超速离心法;二是过滤离心;三是密度梯度离心法；四是免疫磁珠法;五是PS亲和法;六是色谱法。湖南值得信赖的外泌体提取外泌体提取，实验经验丰富。

外泌体提取之后利用电镜来分析其大小和形态，利用流式细胞仪来分析细胞表面标记，通过Western blot和ELISA等方法对蛋白进行分析，或通过qPCR和新一代测序（NGS）来分析RNA。调查发现，在分离exosome时，约有56%的人采用超速离心法，说明这种方法仍是目前的金标准方法。不过这种方法缺点也不少：耗时耗力，往往需要8-30个小时；每次比较多只能处理6个样品；需要大量的起始材料；产量不高。商业化的exosome提取试剂盒已经上市，更为简单省事。

外泌体没有限定单一的分离手段，多种手段都可以进行细胞外囊泡的富集。《指导要求》编写者们认为“高回收率，低特异性”的富集手段是指那些富集囊泡的同时会有大量的非囊泡组分被富集，甚至细胞的整个分泌组都会被掺入其中，归入这一类的分离手段主要包括通过改变电荷或通过高聚物作用的沉淀试剂盒、低分子量截流的超滤分离、超长时间和超高离心力的超速离心等。 目前较常用的外泌体提取方法是differential centrifugation (DC)——差速离心法。也有用试剂盒提取外泌体，但效率均不高。外泌体提取，超离法是比较常用的外泌体纯化手段。

外泌体鉴定，可以用和表面抗原对应的抗体进行免疫印迹（WB）、透射电子显微镜（TEM）、纳米粒径分析（如NanoSight LM10）等来验证。前面也说了，ISEV建议用表面蛋白来界定所提取的细胞外囊泡，所以用CD63来做WB或ELISA是必不可少的了。使用Wako的PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP)（产品编号298-80601），既能鉴定外泌体的CD63信号，又能进行定量、定性分析，一举两得！南京英瀚斯可以做外泌体鉴定。外泌体作为内源性的天然药物载体有着独特的优势，表面由脂质和蛋白质组成，使其可以穿透许多生物膜，揭开外泌体神秘面纱，南京英瀚斯生物。湖南值得信赖的外泌体提取

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外泌体的提取主要包括以下几种方式。一是超速离心法，这是外泌体提取比较常用的方法。此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块，由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种方法得到的是微泡不是外泌体。二是过滤离心，这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性，但同样存在纯度不足的问题。三是密度梯度离心法，用此种方法分离到的外泌体纯度高，但是前期准备工作繁杂，耗时，量少。四是免疫磁珠法，这种方法可以保证外泌体形态的完整，特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备，但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性，不便进行下一步的实验。五是PS亲和法，该方法将PS（磷脂酰丝氨酸）与磁珠结合，利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似，获得的外泌体形态完整，纯度比较高。由于不使用变性剂，不影响外泌体的生物活性，外泌体可用于细胞共培养和体内注射。2016.9《ScientificReports》杂志发表了该方法比较新数据，表明PS法可提取相当高纯度的外泌体湖南值得信赖的外泌体提取

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