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外泌体研究常见问题解答119.在分离过程中，外泌体含量会发生变化吗？准备的步骤越少，结果越好。很明显，即使你是一个非常熟练的操作员，将超离作为预富集步骤也会导致囊泡的损失。因此，即使囊泡的纯度很高，也无法控制哪些囊泡在处理过程中的丢失。10.为什么沉淀法或超速离心法提取的外泌体看不到沉淀？这种问题通常有三种可能性：1）使用的样本体积太小或外泌体含量太低。2）使用了不透明的超速离心管，一般来说外泌体产量都比较小，不透明管底很难见到明显沉淀的，可以当作有沉淀，继续往后操作即可。3）使用了粘附性低的耗材。部分角转管壁粘附性很低，沉淀很难富集或沉淀很容易滑落，请圆底离心管离心。11.外泌体和微囊泡可以分开提取吗？外泌体和微囊泡无法明确区分二者，所以无法完全分开。维思克思推荐使用下列简便方法：提取外泌体等粒子直径小的细胞外囊泡时，请选用10000g离心后的上清样品；提取含微囊泡在内的大粒子直径的细胞外囊泡时，首先要回收1200g离心的上清，然后将其10,000g离心分离获得的沉淀用PBS悬浮后作为样品使用。同时提取上述两种细胞外囊泡，请使用1200g离心分离的上清作为样品。外泌体研究工具高兼容性配方，适配多种样本类型，提升应用范围。性价比胞外囊泡OEM

大体积外泌体样本量分离方法总结大体积外泌体样本在浓缩后根据不同应用，需衔接不同的外泌体分离方法。维思克思总结出现在常用、简便、效果比较好的三种方法。SEC重力柱是基于分子排阻色谱原理，根据被分离组分分子大小差异进行外泌体的分离。具有操作简便、高纯度和高回收率等优点，特别适用于大体积样本中的外泌体分离。分离的外泌体可用于WB分析、NTA或纳米流式粒径分析、电镜检测、组学研究、细胞和动物功能研究等。（WSR0003）SEC离心柱是离心柱式的外泌体分离产品，离心柱中装填的介质能无差别的吸附杂质而不结合外泌体，实现超快速、高收率的外泌体分离。分离的外泌体可用于WB分析、NTA或纳米流式粒径分析、电镜检测、组学研究、细胞和动物功能研究等。（WSP0016）磁珠法外泌体分离试剂盒基于自主研发的均相液体磁珠，能特异性捕获外泌体，实现高纯度、高回收率外泌体分离。具有操作简便、高纯度和高回收率等优点，特别适用于血浆、血清等复杂样本中的外泌体分离。分离的外泌体可用于WB分析、NTA或纳米流式粒径分析、电镜检测、组学研究、细胞和动物功能研究等。（WSR0002-2）实验室胞外囊泡技术服务外泌体研究工具简易操作设计，无需复杂设备，降低实验室入门成本。

外泌体研究常见问题解答122.做外泌体研究，需要多少量的蛋白质？不建议过多关注蛋白质浓度，我们的经验，蛋白质测量与制剂中外泌体的数量之间几乎没有相关性。蛋白量不应作为制剂中外泌体数量的估计。外泌体与蛋白量并不总是一个很好的相关性。我们主要使用细胞培养基和尿液作为起始样本，即使在这种“简单”的溶液中（至少与血浆/血清相比），相关性也不是很好。这就是为什么我们开始关注细胞培养生长条件，并标准化外泌体收获条件，以便在正确的时间收获并提高系统的可重复性。血浆和血清中蛋白质浓度和外泌体含量之间的相关性会更小。许多研究人员使用纳米颗粒跟踪分析（NTA）来测量囊泡的数量和大小分布，但这种方法不能提供相同大小范围内任何污染囊泡的信息。因此，电子显微镜应始终与这种方法相结合。检查污染囊泡存在的一种方法可能是进行蛋白质印迹以检测蛋白质，如gp96，一种ER相关蛋白。3.外泌体WB鉴定时，选择哪个内参蛋白？无内参蛋白。外泌体包裹的蛋白具有随机性，同时不同细胞分泌的外泌体具有异质性，所以外泌体中没有哪种蛋白含量是恒定的，也就没有所谓的内参蛋白了。目前的外泌体WB鉴定，只能用于定性检测。

如何提高细胞外囊泡产量？尽管基于外泌体具有巨大潜力，但传统生产方式产量低和放大困难等特点，严重制约了外泌体的临床应用转化。维思克思总结了提高外泌体产量的方法，包括物理和化学刺激、增加钙离子内流、细胞骨架固定、药物刺激以及特定基因的过表达等，可有效提高外泌体表达量。具体有哪些方法可以提高细胞外囊泡产量呢？01培养条件。采用3D培养替代传统2D培养可提高外泌体产量。缺氧可刺激细胞分泌外泌体。此外，适度降低pH值可显著提高外泌体的表达量。02物理刺激。采用物理刺激的方法可明显增加外泌体的产量。常用物理刺激包括：剪切力、周期性张力、声音和电场刺激等。03分子干预。一般来说，细胞处于应激状态下会增加外泌体的分泌。04诱导表达。脂质体通过内吞作用刺激细胞活性，明显增加外泌体分泌量。磁性纳米微粒可刺激细胞的内吞功能，可增加外泌体表达。以上这些策略均为来自特定细胞和特定条件下所得到的结果。想跳过繁琐的优化过程，直接使用上高产又稳定的外泌体培养基吗？维思克思推出的外泌体培养基(WSC0008)和无外泌体血清可满足您的要求！外泌体研究工具高纯度提取试剂盒，减少杂质干扰，提升实验数据准确性。

氯仿买不到？维思克思包有的Trizol法提取RNA是生物实验中常用的RNA提取方法，然而使用该方法也伴随着不少困扰。比如，氯仿属于管制试剂，难以购买！比如，氯仿属于剧毒试剂，使用时气味十分难闻！如果你也遇到以上问题，为什么不选择一款更安全、更环保、使用效果和氯仿相同的氯仿替代物呢？产品特点：安全环保，购买方便；传统抽提试剂氯仿属于危险化学品，可引起急性中毒以及致。本产品与氯仿相比毒性更小，更安全、环保；分层效果明显，本产品有更强的疏水性，水相分层更为明显，易于吸取，手残党友好；RNA质量和得率无差别，提取出的RNA得率及质量与氯仿提取出的五明显差异，可完全替代氯仿；用量小，一瓶更耐用，相较于氯仿，本品抽提RNA时，操作步骤相同，但用量为氯仿的一半，更耐用；适用范围广，可适用于各种动植物细胞、组织以及微生物样本的RNA提取。产品信息：RNAExtractionAgent（WZ13）。外泌体研究工具通用型适配设计，兼容多种实验平台，降低设备投入成本。sEVs应用研究

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外泌体研究常见问题解答145.外泌体RT-qPCR实验是选择哪个靶标作为内参？外泌体没有公认内参，理由如上。常规内参基因在外泌体中表达量甚至可能比目标基因还低。外参是在没有合适内参的情况下的替代物。miRNA检测外参是化学合成的线虫短片段单链RNA(cel-miR-39-3p)在人、小鼠、大鼠中均无同源片段，比较大限度降低了对定量实验造成的干扰。6.外泌体SmallRNA-seq实验，样本量有什么要求？肿瘤细胞系推荐使用40mL以上的初始样品量。某些细胞（如悬浮细胞、干细胞、神经细胞等）中外泌体含量比较低，建议使用100mL的初始样品量。一般需提取到10ng以上的TotalRNA，才可以用于SmallRNA-seq实验。7.如何确保外泌体RT-qPCR和SmallRNA-seq实验的成功率？为了保证转录组实验的成功率，建议对提取的外泌体RNA进行质控，确保RNA质量。如检测RNA的浓度、纯度和片段分布等，但由于外泌体RNA含量较低，建议使用商业的外泌体RNA质控试剂盒对RNA质量进行评估。性价比胞外囊泡OEM

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