科研用sEVs功能研究

你分离的血清/血浆外泌体真的干净吗？对于血清和血浆等复杂样本，分离外泌体是十分棘手的。主要原因是血液样本的成分比较复杂，很容易造成细胞外囊泡的污染。脂蛋白颗粒就是常见细胞外囊泡难以分离的污染物之一。外泌体与脂蛋白的体积、密度十分相近，以至于很多传统的方法都不能把他们完全分离。1.密度梯度超速离心高密度脂蛋白的密度与细胞外囊泡密度相近，所以它是密度梯度离心主要的污染脂蛋白。低密度脂蛋白虽密度低于EV，但离心的方法还不足以完全将二者分开。因此使用密度梯度超速离心的方式可能无法完全排除脂蛋白污染的可能性。2.分子排阻法（SEC）SEC是根据粒径大小进行外泌体分离。脂蛋白与外泌体尺寸相近，尤其是极低密度脂蛋白与乳糜微粒。因此，也无法通过分子排阻法将脂蛋白与细胞外囊泡完全分离。3.超速离心法在粒径和密度相差不大的情况下，颗粒的沉降速度也相差不大。尤其是脂蛋白颗粒数远超于外泌体时，被称为金标准的超离法也稍显不足了。基于此，维思克思推荐选择磁珠法（WSR0002-2），是基于自主研发的均相液体磁珠，可特异性捕获外泌体而不吸附杂质，实现高纯度外泌体分离。外泌体研究工具常温运输设计，无需冷链物流，降低运输成本与风险。科研用sEVs功能研究

外泌体表征与定量难在什么地方？又该怎么做？我们拜访过很多外泌体研究工作者，其中谈到多的是外泌体难以分离，分离后的外泌体不好定量，定量的外泌体数据是否准确等问题。03如何表征考虑到外泌体中其他杂质对定量检测的影响，建议先进行外泌体纯度表征，确保外泌体纯度在合理范围内，再进行外泌体定量。外泌体纯度表征可以用颗粒数/总蛋白、总蛋白/总脂质、颗粒数/总脂质、颗粒数/总核酸、总蛋白/总核酸等，从多个维度来评估外泌体纯度。04如何定量外泌体发挥功能与其所载货物相关，对外泌体定量可以考虑检测外泌体中某些分子来评估。如某些蛋白标志、脂质、核酸、糖类等分子。针对外泌体表征与定量此类问题，维思克思不断尝试，经多次验证终推出了外泌体表征与定量一系列产品。具体产品包括：BCA蛋白定量试剂盒、外泌体脂质定量试剂盒、外泌体核酸定量试剂盒、外泌体检测抗体、外泌体RNAQC试剂盒、外泌体RNA定量试剂盒。天然EVs转录组外泌体研究工具一站式采购方案，省去多渠道比价，降低采购时间成本。

外泌体研究常见问题解答145.外泌体RT-qPCR实验是选择哪个靶标作为内参？外泌体没有公认内参，理由如上。常规内参基因在外泌体中表达量甚至可能比目标基因还低。外参是在没有合适内参的情况下的替代物。miRNA检测外参是化学合成的线虫短片段单链RNA(cel-miR-39-3p)在人、小鼠、大鼠中均无同源片段，比较大限度降低了对定量实验造成的干扰。6.外泌体SmallRNA-seq实验，样本量有什么要求？肿瘤细胞系推荐使用40mL以上的初始样品量。某些细胞（如悬浮细胞、干细胞、神经细胞等）中外泌体含量比较低，建议使用100mL的初始样品量。一般需提取到10ng以上的TotalRNA，才可以用于SmallRNA-seq实验。7.如何确保外泌体RT-qPCR和SmallRNA-seq实验的成功率？为了保证转录组实验的成功率，建议对提取的外泌体RNA进行质控，确保RNA质量。如检测RNA的浓度、纯度和片段分布等，但由于外泌体RNA含量较低，建议使用商业的外泌体RNA质控试剂盒对RNA质量进行评估。

外泌体RNA定量试剂盒外泌体的组成复杂，不仅包含脂质和蛋白质，RNA也是其组成部分。从目前文献报道统计结果来看，RNA是外泌体发挥功能的主要物质。研究外泌体RNA组成和含量具有重要意义。从原理上来说，既然蛋白浓度可以一直作为外泌体定量和表征的重要指标。那么用RNA来对外泌体进行定量和表征也是非常可行的。外泌体中包含RNA分子，其在细胞通讯、疾病发展等方面具有重要的研究和应用价值。但目前外泌体缺乏有效的定量和表征方法，单一的检测技术都有其局限性。WSR0039不需提取外泌体RNA，直接检测微量RNA含量。具有操作简便，灵敏度高，线性范围广，易于检测等特点。该试剂盒的检测线性范围是0-25ng，比较低检测限可至0.2ng。应用范围：外泌体RNA定量、外泌体表征产品信息：ExosomalRNAQuantificationKit(Fluorometric)（WSR0039）。外泌体研究工具低损耗设计，试剂利用率高，减少实验成本浪费。

外泌体研究常见问题解答91.外泌体的分离方法有哪些，哪种更好？分离是进行外泌体研究关键的一步，只有选择了合适的方法才能得到理想的实验结果。分离方法包括：超速离心、尺寸排阻、免疫磁珠、聚合物沉淀、亲和磁珠/膜等方法。根据外泌体的大小，密度和表面标志物的不同进行分离，不同提取外泌体方法优劣势比较，受限于篇幅，详细版请联系维思克思生物科技获取。2.细胞培养上清中死细胞对外泌体分离的影响？在细胞凋亡/死亡过程中会释放大量Evs，会混入活细胞分泌的外泌体中，而目前的外泌体分离方法并不能将两者区分开来。所以在收集细胞培养上清样本时，需要保证细胞活率应不小于95%。3.大体积的样本类型，如何分离外泌体？大体积样本，如细胞培养上清、尿液等，可以先浓缩样本（如超滤或外泌体浓缩试剂等），减少样本体积，再使用常规的外泌体分离方法。4.复杂的样本类型，如何分离得到高纯度的外泌体？复杂的样本类型如血清、血浆、奶制品、脑脊液等，含有很多与外泌体在尺寸和密度接近的杂质，常规的外泌体分离方法难以获取高纯度的外泌体，建议使用亲和的外泌体分离方法，如PS亲和、免疫亲和、膜亲和等外泌体分离试剂盒。外泌体研究工具标准化质量检测，每批次严格质控，保障实验可靠性。金线莲Extracellular Vesicles原料

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外泌体表征与定量难在什么地方？又该怎么做？我们拜访过很多外泌体研究工作者，其中谈到多的是外泌体难以分离，分离后的外泌体不好定量，定量的外泌体数据是否准确等问题。2.单一表征方法的局限性对外泌体的纯度表征目前采用的是外泌体阴性蛋白标志、颗粒蛋白比。外泌体阴性蛋白标志一般采用WB检测，属于定性检测，与样本处理、抗体、显色、曝光时间等多个因素有关，如果作为纯度表征的指标，显然是不合适的。在蛋白聚集体或其他杂质（糖/脂质/核酸等）聚集体/大颗粒较多时，颗粒蛋白比的数值也可能较大，其作为纯度表征指标也有其局限性。既然上述外泌体定量方法、表征方法具有其局限性，那么如何科学的对外泌体进行定量和表征呢？科研用sEVs功能研究

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