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外泌体研究常见问题解答72.哪些标记物可用于外泌体表征？检测膜结合或膜相关蛋白，以验证膜的存在。许多外泌体中发现了CD63、CD81和CD9等。然而检测到至少2种不同细胞系释放CD9阴性的外泌体（Jurkat和几种B细胞淋巴瘤细胞）。通常检测CD9、CD81和CD63以验证我们的制剂中是否存在膜。同样重要的是需要确定来自细胞器的污染囊泡水平：ER：热休克蛋白90B1，钙内；高尔基：GM130；线粒体：细胞色素C；细胞核：组蛋白。外泌体分子组成因细胞来源而异。虽然这些单个分子类别的测量可用于估计外泌体丰度，但这些值不一定与外泌体浓度完全相关，也不存在跨EV源样本的普遍性；因此，不应将其作为的外泌体浓度测量方法。不同原理外泌体表征方法的测量值不太可能有相同偏差；例如，光学与非光学方法测量的外泌体直径。由于许多外泌体表征方法不是特异性的，就是无法检测所有的外泌体。植物和中草药囊泡目前公认的特异性蛋白标志物，据多篇文献报道TET-8很可能是植物囊泡的潜在蛋白标志物。细菌的特异性蛋白标志物，脂多糖（革兰氏阴性菌）、脂胞壁酸质（革兰氏阳性菌）和分枝杆菌脂质。外泌体研究工具原厂直供模式，省去中间商环节，保障产品质量稳定。高质量sEVs荧光染料

外泌体研究常见问题解答105.外泌体研究，应选用血浆还是血清？血清是血液凝固之后收集的液体，所以其中少了纤维蛋白原，凝血因子，以及多了很多凝血产物。纤维蛋白原可转化为纤维蛋白，具有凝血功能。在凝血过程中血小板会分泌大量的外泌体，有研究发现血清中有接近50%的外泌体来自额外的分泌。血浆=血液-血细胞血清=血浆-纤维蛋白原-凝血因子所以一般实验选择血浆，在特殊情况下，如研究与血小板相关的疾病的时候，当然是血清更适合。6.外泌体血液样本提取需注意事项？全血在长时间放置，冷冻、离心等会发生溶血现象，此时不建议分离外泌体。7.细胞培养去除血清源外泌体？a.将细胞培养用的血清通过100000g超速离心10h，去除血清外泌体；b.选择无血清培养基进行细胞培养。c.使用商业化的无外泌体胎牛血清（WSC0020）8.如何提取组织细胞外泌体？将组织剪成小块，在无血清培养基中培养12h；转移至离心管中，4℃3000g离心20min去除培养液中杂质和细胞碎片，将上清液用0.45μm过滤，接着用0.2μm过滤，然后选择合适的外泌体分离方法。高质量sEVs荧光染料外泌体研究工具多功能检测模块，一项试剂多指标分析，提升性价比。

外泌体RNA质控解决方案当你小心翼翼将微量样本、花费大量时间提取出外泌体RNA后,还在苦恼RNA质量无法测定？好不容易进行定量检测时，你或许又会出现260/280值、260/230值较佳，但RNA浓度却又极低？拜托！下次请一定要试试这款RNA质控试剂盒！RNA质控原来如此简单！外泌体RNAQC试剂盒是全球、拥有自主知识产权、创新式外泌体表征方法的外泌体RNA质控试剂盒!本产品是将外泌体RNA反转后，再使用SYBRGreenI嵌合荧光法qPCR的外泌体RNA质控试剂盒。经过大量研究分析，筛选出2个阳性外泌体RNA靶标（QCAssayA和B是阳性RNA靶标的扩增引物）和1个阴性外泌体RNA靶标（QCAssayC是阴性RNA靶标的扩增引物），用于表征外泌体RNA的质量。本产品可以对扩增产物进行实时检测，显著提高了检测灵敏度，并省略了PCR反应后的电泳步骤，非常适合于外泌体RNA的检测。产品信息：ExosomalRNAQCKitV1（WSR0013-1）。

外泌体研究常见问题解答35.CD9或CD81等是否对外泌体起源具有特异性？目前，对于一般的外泌体标记物还没有达成共识。研究界目前的建议是结合检测许多膜结合或膜相关蛋白，以验证膜的存在。靶点CD63和CD81存在于许多不同的外泌体制剂中，CD9也是如此。然而，检测到至少2种不同的细胞系释放CD9阴性的外泌体（Jurkat细胞和几种B细胞淋巴瘤细胞）。同样重要的是，通过对已知在ER、高尔基体或细胞核等隔室中表达的标记物进行染色，来证明不存在污染性囊泡。同样重要的是，用相同的标记物来表征宿主细胞。6.外泌体中是否包含DNA？一般认为外泌体中不包含DNA，或包含少量线粒体DNA。因为外泌体在胞质中形成与包裹货物，而在胞质中存在少量降解的线粒体DNA。目前有一些研究发现，在外泌体的表面，称之为“corona”，中文叫“冠“或”晕“，在外泌体分泌到细胞外后，会吸附微量的游离DNA。外泌体研究工具长效活性维持，多次使用仍稳定，降低重复采购频率。

大体积外泌体样本量处理方案大体积外泌体样本在浓缩后根据不同应用，衔接不同的外泌体分离纯化方法，见下文。01外泌体分离纯化对于外泌体的分离纯化，市面上已有许多方法。维思克思总结出常用、简便、效果比较好的三种方法。SEC重力柱基于分子排阻色谱原理，根据被分离组分分子大小差异进行外泌体的分离。具有操作简便、高纯度和高回收率等优点，特别适用于大体积样本中的外泌体分离。SEC离心柱是离心柱式的外泌体分离产品，离心柱中装填的介质能无差别的吸附杂质而不结合外泌体，实现超快速、高收率的外泌体分离。磁珠法外泌体分离试剂盒能特异性捕获外泌体而不吸附杂质，实现高纯度、高回收率外泌体分离。具有操作简便、高纯度和高回收率等优点，特别适用于血浆、血清等复杂样本中的外泌体分离。02外泌体RNA提取在外泌体RNA提取步骤中，常用的是磁珠法和沉淀法。磁珠法外泌体总RNA提取试剂盒能特异性捕获外泌体，实现高纯度、高回收率提取，特别适用于血浆、血清等复杂样本RNA提取。沉淀法外泌体总RNA提取试剂盒，于外泌体微量RNA的提取，具有提取效率高、提取的RNA种类多、回收的miRNA含量高等特点。外泌体研究工具小批量试用装供应，适合前期方法学验证，降低试错成本。高质量sEVs荧光染料

外泌体研究工具浓缩型试剂配方，同等实验需求用量更少，降低长期使用成本。高质量sEVs荧光染料

EVs研究中，通常EVs来源，纯化方法，定量技术，给药对象等这些因素都会导致给药剂量的差异。因此建立一个完善给药剂量系统就显得尤为重要。确定EVs有效剂量建议分为两个方向，一个是长期层面；一个是短期层面。长期上需要众多EVs从业者，制定有效的、适用于不同来源、不同生产工艺、不同纯化方法的EVs量化或表征方法，这个层面无法短期内实现。在短期内，比较好购买商品化EVs，或者自己确定固定来源和生产工艺、定量方法的EVs，然后做细胞或动物的量效实验时，做梯度稀释的量效实验，以确定比较好的给药剂量，此方法可以。为尽快解决问题，达到预期实验效果，只能从短期层面考虑。维思克思在外泌体行业深耕近十年，总结出EVs剂量的方案：选用维思克思MSC/HEK293/NK/植物外泌体标准品可缩短时间，提高实验效率。外泌体标准品的来源、生产工艺、纯化方法等都为固定的，外泌体标准品需试验确定一次剂量即可，后续实验都可使用统一剂量。该种方法更为简便易得且节约时间。除商业化外泌体以外，同时还配套了外泌体研究相关产品，包括但不仅限于细胞培养基、外泌体分离、提取试剂盒、外泌体示踪试剂盒等产品。高质量sEVs荧光染料

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