如何提高细胞外囊泡产量?尽管基于外泌体具有巨大潜力,但传统生产方式产量低和放大困难等特点,严重制约了外泌体的临床应用转化。维思克思总结了提高外泌体产量的方法,包括物理和化学刺激、增加钙离子内流、细胞骨架固定、药物刺激以及特定基因的过表达等,可有效提高外泌体表达量。具体有哪些方法可以提高细胞外囊泡产量呢?01培养条件。采用3D培养替代传统2D培养可提高外泌体产量。缺氧可刺激细胞分泌外泌体。此外,适度降低pH值可显著提高外泌体的表达量。02物理刺激。采用物理刺激的方法可明显增加外泌体的产量。常用物理刺激包括:剪切力、周期性张力、声音和电场刺激等。03分子干预。一般来说,细胞处于应激状态下会增加外泌体的分泌。04诱导表达。脂质体通过内吞作用刺激细胞活性,明显增加外泌体分泌量。磁性纳米微粒可刺激细胞的内吞功能,可增加外泌体表达。以上这些策略均为来自特定细胞和特定条件下所得到的结果。想跳过繁琐的优化过程,直接使用上高产又稳定的外泌体培养基吗?维思克思推出的外泌体培养基(WSC0008)和无外泌体血清可满足您的要求!外泌体研究工具通用型适配设计,兼容多种实验平台,降低设备投入成本。干细胞细胞外囊泡靠谱供应商

外泌体研究常见问题解答145.外泌体RT-qPCR实验是选择哪个靶标作为内参?外泌体没有公认内参,理由如上。常规内参基因在外泌体中表达量甚至可能比目标基因还低。外参是在没有合适内参的情况下的替代物。miRNA检测外参是化学合成的线虫短片段单链RNA(cel-miR-39-3p)在人、小鼠、大鼠中均无同源片段,比较大限度降低了对定量实验造成的干扰。6.外泌体SmallRNA-seq实验,样本量有什么要求?肿瘤细胞系推荐使用40mL以上的初始样品量。某些细胞(如悬浮细胞、干细胞、神经细胞等)中外泌体含量比较低,建议使用100mL的初始样品量。一般需提取到10ng以上的TotalRNA,才可以用于SmallRNA-seq实验。7.如何确保外泌体RT-qPCR和SmallRNA-seq实验的成功率?为了保证转录组实验的成功率,建议对提取的外泌体RNA进行质控,确保RNA质量。如检测RNA的浓度、纯度和片段分布等,但由于外泌体RNA含量较低,建议使用商业的外泌体RNA质控试剂盒对RNA质量进行评估。灵芝外泌体厂家定制外泌体研究工具一站式采购方案,省去多渠道比价,降低采购时间成本。

脂质定量试剂盒应用场景:外泌体表征、脂质体定量工具、脂质功能研究方法、脂质代谢疾病进展评估。外泌体表征。外泌体由磷脂双分子层包裹,包含脂质等代谢物。脂质定量试剂盒可用于外泌体的脂质定量,既可以测定外泌体的脂质含量,为脂质研究提供有力工具,又能作为外泌体定量和表征方法的有效补充。脂质体定量工具。脂质体是一种类似生物膜结构的脂质双分子层微小囊泡。随着生物技术的发展,脂质体制备工艺的逐步完善,其在药物递送方面应用逐渐成熟。近,脂质体也应用在化妆品行业和食品行业。脂质定量试剂盒可用于指导脂质体、纳米脂质颗粒等脂质含量测定,工艺优化、配方开发。由于试剂盒具有获取容易,检测速度快,灵敏度高等优点,可以加快脂质体开发速度,易于表征脂质体质量。脂质功能研究方法。脂质在人体内有不同用途,涉及能量产生、信息传输等功能。可通过分析各种不同代谢途径的脂质含量变化,揭示出相关疾病发生、发展过程中脂质的功能和影响。脂质代谢疾病进展评估。可促进我国血脂测定进一步规范化与标准化。维思克思的脂质定量试剂盒WSR0028-2与WSR0028相结合,可更好表征外泌体,LNP等!
外泌体研究常见问题解答47.外泌体中是否存在18SmRNA?通过测序和qPCR分析了外泌体RNA的含量,这些囊泡肯定包括一些18sRNA。早期的论文具有误导性,一个团队声称外泌体是miRNA和mRNA阴性的。事实上,外泌体包含核糖体RNA、tRNA和许多非编码RNA,并且很大一部分miRNA实际上与蛋白质(例如Ago2)相关,而不是外泌体。8.外泌体研究的困难是什么?(1)外泌体异质性,包括来源异质性、大小异质性、成分异质性等;(2)高纯度的外泌体获取;(3)外泌体鉴定表征;(4)外泌体保存。外泌体研究工具自动化数据分析兼容,适配主流软件,提升分析效率。

外泌体标记真的只能用PKH和DiR吗?外泌体作为近几年的“科研新贵”,可谓是红极一时。由于它们具有独特的迁移、靶向和选择性内化进入特定细胞的能力,是非常有前途的递送载体。然而,目前在外泌体的示踪研究和应用上还存在一些难点:难点一:目前对于胞外囊泡的标记方法有很多种,包括亲脂性的染料(如:PKH、Dil等),这些染料与外泌体膜不是共价结合,而是通过疏水相互作用短暂结合在一起的。在后续的细胞摄取时,会出现示踪染料在不同膜结构或脂溶性物质间发生不断解离和结合的现象,从而影响结果的准确性。ps:分离的外泌体中也会存在一些脂质,也会与示踪试剂结合。难点二:目前外泌体等胞外囊泡有一部分的归宿是在溶酶体,而溶酶体的酸性环境,绝大多数外泌体示踪染料发出的荧光都会淬灭,那么这一部分外泌体的去向就难以检测到。该外泌体示踪试剂盒来自维思克思生物科技,是该公司两项发明专利转化而来,对比其他染色方法,该探针具有低背景、高效率、强耐酸的优势!产品信息:ExosomeWisTracker-IIKit(WSR0001-2)。外泌体研究工具常温运输设计,无需冷链物流,降低运输成本与风险。大规模外泌体实力厂家
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外泌体研究常见问题解答122.做外泌体研究,需要多少量的蛋白质?不建议过多关注蛋白质浓度,我们的经验,蛋白质测量与制剂中外泌体的数量之间几乎没有相关性。蛋白量不应作为制剂中外泌体数量的估计。外泌体与蛋白量并不总是一个很好的相关性。我们主要使用细胞培养基和尿液作为起始样本,即使在这种“简单”的溶液中(至少与血浆/血清相比),相关性也不是很好。这就是为什么我们开始关注细胞培养生长条件,并标准化外泌体收获条件,以便在正确的时间收获并提高系统的可重复性。血浆和血清中蛋白质浓度和外泌体含量之间的相关性会更小。许多研究人员使用纳米颗粒跟踪分析(NTA)来测量囊泡的数量和大小分布,但这种方法不能提供相同大小范围内任何污染囊泡的信息。因此,电子显微镜应始终与这种方法相结合。检查污染囊泡存在的一种方法可能是进行蛋白质印迹以检测蛋白质,如gp96,一种ER相关蛋白。3.外泌体WB鉴定时,选择哪个内参蛋白?无内参蛋白。外泌体包裹的蛋白具有随机性,同时不同细胞分泌的外泌体具有异质性,所以外泌体中没有哪种蛋白含量是恒定的,也就没有所谓的内参蛋白了。目前的外泌体WB鉴定,只能用于定性检测。干细胞细胞外囊泡靠谱供应商
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