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外泌体研究常见问题解答47.外泌体中是否存在18SmRNA？通过测序和qPCR分析了外泌体RNA的含量，这些囊泡肯定包括一些18sRNA。早期的论文具有误导性，一个团队声称外泌体是miRNA和mRNA阴性的。事实上，外泌体包含核糖体RNA、tRNA和许多非编码RNA，并且很大一部分miRNA实际上与蛋白质（例如Ago2）相关，而不是外泌体。8.外泌体研究的困难是什么？（1）外泌体异质性，包括来源异质性、大小异质性、成分异质性等；（2）高纯度的外泌体获取；（3）外泌体鉴定表征；（4）外泌体保存。外泌体研究工具标准化套装，涵盖提取到检测全流程，提升实验效率。组织EVs转录组

外泌体定量和表征。研究外泌体的同行们（包括我）一直被外泌体的定量和表征所困扰，什么样的外泌体才是好的外泌体呢？是评估其活性？纯度？蛋白浓度？还是其他什么指标？或者说我们在做实验时，怎样对外泌体进行定量呢？这个可以说是进行外泌体实验的第一步，必须确定外泌体的量，才好判断实验变量是否影响外泌体的发生或者确定下游应用实验的给药剂量。你们是如何进行定量的呢？目前的外泌体定量方法有以下几种，分别是：纳米颗粒跟踪分析（NTA）、纳米流式、表面标志物的ELISA定量试剂盒、BCA或Bradford蛋白定量试剂盒。注：受认知所限，有没有涵盖的，欢迎补充。上述外泌体定量方法中，以BCA蛋白浓度测定应用的广，也容易得到（也就是可及性很高）。但是，但是我们分离的外泌体，因获取样本的不一致，每种样本中杂蛋白的含量不尽相同，同时分离方法也不一定相同，这就导致我们很难确定蛋白量与外泌体量的对应关系。所以，我们这些外泌体研究者就在两难之间不断横跳。为了解决这些困境，维思克思生物科技提供了整套外泌体鉴定技术服务、外泌体分离、示踪、保存、游离染料清qing除、蛋白定量、脂质定量、核酸定量等系列产品。侧柏Extracellular Vesicles应用外泌体研究工具低损耗设计，试剂利用率高，减少实验成本浪费。

大体积外泌体样本量处理方案大体积外泌体样本在浓缩后根据不同应用，衔接不同的外泌体分离纯化方法，见下文。01外泌体分离纯化对于外泌体的分离纯化，市面上已有许多方法。维思克思总结出常用、简便、效果比较好的三种方法。SEC重力柱基于分子排阻色谱原理，根据被分离组分分子大小差异进行外泌体的分离。具有操作简便、高纯度和高回收率等优点，特别适用于大体积样本中的外泌体分离。SEC离心柱是离心柱式的外泌体分离产品，离心柱中装填的介质能无差别的吸附杂质而不结合外泌体，实现超快速、高收率的外泌体分离。磁珠法外泌体分离试剂盒能特异性捕获外泌体而不吸附杂质，实现高纯度、高回收率外泌体分离。具有操作简便、高纯度和高回收率等优点，特别适用于血浆、血清等复杂样本中的外泌体分离。02外泌体RNA提取在外泌体RNA提取步骤中，常用的是磁珠法和沉淀法。磁珠法外泌体总RNA提取试剂盒能特异性捕获外泌体，实现高纯度、高回收率提取，特别适用于血浆、血清等复杂样本RNA提取。沉淀法外泌体总RNA提取试剂盒，于外泌体微量RNA的提取，具有提取效率高、提取的RNA种类多、回收的miRNA含量高等特点。

外泌体研究常见问题解答51.外泌体样品如何保存？长期保存，置于-80℃。冻存前，离心去除细胞和细胞碎片，再将样品分装保存在-80℃。如果条件允许，建议用新鲜样品进行外泌体的分离和后续实验。短期保存（1-2天），置于4℃（确保无菌）。2.分离的外泌体如何保存？（1）使用低吸附离心管或冻存管，减少外泌体粘附。（2）对于短期而言，外泌体可以在4°C下储存长达1周。对于长期储存，外泌体可以在-20°C或-80°C下储存。当长期储存外泌体时，重要的是要考虑它们是否需要多次解冻。如果需要多次应用（因此需要多次解冻）进行分析，我们建议将外泌体悬浮液等分到多个试管中，以便每个试管只经历一个冷冻/解冻循环。多次冻融循环会对外泌体造成损伤并减少其数量。外泌体研究工具自动化数据分析兼容，适配主流软件，提升分析效率。

氯仿买不到？维思克思包有的Trizol法提取RNA是生物实验中常用的RNA提取方法，然而使用该方法也伴随着不少困扰。比如，氯仿属于管制试剂，难以购买！比如，氯仿属于剧毒试剂，使用时气味十分难闻！如果你也遇到以上问题，为什么不选择一款更安全、更环保、使用效果和氯仿相同的氯仿替代物呢？产品特点：安全环保，购买方便；传统抽提试剂氯仿属于危险化学品，可引起急性中毒以及致。本产品与氯仿相比毒性更小，更安全、环保；分层效果明显，本产品有更强的疏水性，水相分层更为明显，易于吸取，手残党友好；RNA质量和得率无差别，提取出的RNA得率及质量与氯仿提取出的五明显差异，可完全替代氯仿；用量小，一瓶更耐用，相较于氯仿，本品抽提RNA时，操作步骤相同，但用量为氯仿的一半，更耐用；适用范围广，可适用于各种动植物细胞、组织以及微生物样本的RNA提取。产品信息：RNAExtractionAgent（WZ13）。外泌体研究工具大包装经济方案，适合长期稳定研究，平均成本更低。工程化ExosomeNTA粒径检测

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外泌体研究常见问题解答122.做外泌体研究，需要多少量的蛋白质？不建议过多关注蛋白质浓度，我们的经验，蛋白质测量与制剂中外泌体的数量之间几乎没有相关性。蛋白量不应作为制剂中外泌体数量的估计。外泌体与蛋白量并不总是一个很好的相关性。我们主要使用细胞培养基和尿液作为起始样本，即使在这种“简单”的溶液中（至少与血浆/血清相比），相关性也不是很好。这就是为什么我们开始关注细胞培养生长条件，并标准化外泌体收获条件，以便在正确的时间收获并提高系统的可重复性。血浆和血清中蛋白质浓度和外泌体含量之间的相关性会更小。许多研究人员使用纳米颗粒跟踪分析（NTA）来测量囊泡的数量和大小分布，但这种方法不能提供相同大小范围内任何污染囊泡的信息。因此，电子显微镜应始终与这种方法相结合。检查污染囊泡存在的一种方法可能是进行蛋白质印迹以检测蛋白质，如gp96，一种ER相关蛋白。3.外泌体WB鉴定时，选择哪个内参蛋白？无内参蛋白。外泌体包裹的蛋白具有随机性，同时不同细胞分泌的外泌体具有异质性，所以外泌体中没有哪种蛋白含量是恒定的，也就没有所谓的内参蛋白了。目前的外泌体WB鉴定，只能用于定性检测。组织EVs转录组

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