什么是液相色谱?
液相色谱是一类分离与分析技术,其特点是以液体作为流动相,固定相可以有多种形式,如纸、薄板和填充床等。在色谱技术发展的过程中.为了区分各种方法,根据固定相的形式产生了各自的命名,如纸色谱、薄层色谱和柱液相色谱。
经典液相色谱的流动相是依靠重力缓慢地流过色谱柱,因此固定相的粒度不可能太小(100μm~150μm左右)。分离后的样品是被分级收集后再进行分析的,使得经典液相色谱不仅分离效率低、分析速度慢,而且操作也比较复杂。直到20世纪60年代.发展出粒度小于10μm的高效固定相,并使用了高压输液泵和自动记录的检测器,克服了经典液相色谱的缺点,发展成高效液相色谱,也称为高压液相色谱。
双恒温模式:蒸馏气体和加压气体。新疆高效液相色谱系统厂家直销液相色谱类型
液相色谱按其分离机理,可分为四种类型--吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱、凝胶色谱法
分配色谱法
这种色谱的流动相和固定相都是液体,样品分子在两个液相之间很快达到平衡分配,利用各组分在两相中分配系数的差异进行分离,类似于萃取过程。
一般常用的固定液有β,β'-氧二丙腈(ODPN)、聚乙二醇(PEG400~4000)、三甲撑乙二醇(TMG)和角鲨烷(SQ)。采用与气相色谱(GC)同样的方法,将固定液涂渍在多孔的载体表面,但在使用中固定液易流失。目前,应用较多的是键合固定相。在这种固体相中,固定液不是涂在载体表面,而是通过化学反应在纯硅胶颗粒表面键合上某种有机基团。
例如,利用氯代十八烷基硅烷与硅胶表面的羟基(-OH)之间的反应就可以形成一烷基化表面。这种固定液的优点是不易被流动相剥蚀。在分配色谱法中,流动相可为纯溶剂,也可以采用混合溶剂进行梯度淋洗,其极性应与固定液差别大一些,以避免两者之间相溶。通常可分为正相分配和反相分配。
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Vanquish Duo 系统可采用多种分析检测器,包括质谱(MS)、二极管阵列检测(DAD)、电雾式检(CAD)、可变波长检测(VWD)和荧光检测(FLD)。
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高效液相色谱分离原理
离子对
(Ion Pair Chromatography)
离子对色谱法是将一种 ( 或多种 ) 与溶质分子电荷相反的离子 ( 称为对离子或反离子 ) 加到流动相或固定相中,使其与溶质离子结合形成疏水型离子对化合物,从而控制溶质离子的保留行为。其原理可用下式表示:X水相Y-水相 === X Y-有机相
式中:X 水相--流动相中待分离的有机离子(也可是阳离子);Y-水相--流动相中带相反电荷的离子对(如氢氧化四丁基铵、氢氧化十六烷基三甲铵等);X Y---形成的离子对化合物。
当达平衡时:
KXY = [X Y-]有机相/[ X ]水相[Y-]水相
根据定义,分配系数为:
DX= [X Y-]有机相/[ X ]水相= KXY [Y-]水相
[讨论:DX与保留值的关系]
离子对色谱法(特别是反相)解决了以往难以分离的混合物的分离问题,诸如酸、碱和离子、非离子混合物,特别是一些生化试样如核酸、核苷、生物碱以及药物等分离。
这款适合串联 LC 或 LC-MS 工作流程的 Vanquish Duo 可增加实验室样品和投资回报。
串联 LC 或 LC-MS应用提**析通量 Vanquish Duo系统
串联 LC 或 LC-MS 的 Vanquish Duo 系统将两个泵和两个色谱柱之间的分析分开。一个泵运行分析梯度,而另一个泵运行再生平衡梯度。您可通过该项配置,使用两个相同的色谱柱更快地运行序列,而不影响数据品质。
串联 LC 或 LC-MS(Thermo Scientific™ Q Exactive™ HF 组合型四极杆 Orbitrap™ 质谱仪)的Thermo Scientific™ Vanquish™ Horizon Duo UHPLC 系统的重现性结果,在此显示了五个总离子流色谱图的重叠图。采用 Thermo Scientific™ SMART™ 消化试剂盒消化英利昔单抗。
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高效液相色谱进样装置
⑴注射器进样装置:进样所用微量注射器及进样方式与 GC法一样。进样压力150×10^5Pa时,必须采用停流进样。⑵高压定量进样阀:与GC法用的流通法相似,能在高压下进样。
高效液相色谱色谱柱
色谱柱是色谱仪**重要的部件(心脏)。通常用厚壁玻璃管或内壁抛光的不锈钢管制作的,对于一些有腐蚀性的样品且要求耐高压时,可用铜管、铝管或聚四氟乙烯管。柱子内径一般为1~6 mm。常用的标准柱型是内径为4.6 或3.9mm ,长度为15 ~30cm 的直形不锈钢柱。填料颗粒度5 ~10μm ,柱效以理论塔板数计大约 7000 ~10000。
发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 新疆高效液相色谱系统厂家直销