血浆外泌体提取方法

研究采用蔗糖密度梯度离心联合2次PEG6000沉淀，极大地降低了外泌体的提取成本，且获得的外泌体不仅表达外泌体公认的标志蛋白分子，同时也表达胎盘特异性蛋白分子，证明通过这种方法获得的外泌体是胎盘来源外泌体。通过蔗糖密度梯度离心后得到的外泌体沉淀经蛋白质SDS-PAGE胶电泳，银染后可见各蛋白分子条带清晰可见，动态光散射分析粒径，结果显示获得的外泌体颗粒粒径大部分分布于28-91nm之间，与文献报道外泌体颗粒大小相一致。胎盘外泌体经过PKH67荧光染料染色后，与细胞共孵育，荧光显微镜下观察外泌体具备进入细胞的活性，进一步验证了我们应用此种改良的分离方法可有效的获得胎盘来源的外泌体。本研究通过蔗糖密度梯度离心联合2次PEG6000沉淀成功分离得到母体血清中胎盘来源外泌体，并从蛋白标志分子、电镜、粒径及分布、进入细胞活性四方面对其进行了鉴定，为研究妊娠期间胎盘外泌体在正常妊娠及胎盘源性并发症中的作用奠定了基础。外泌体与各种疾病的相关性被检测出，特别是血液中释放的病细胞来源的外泌体。血浆外泌体提取方法

外泌体特指直径在30-150nm的囊泡，其主要来源于细胞内多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族（CD63,CD81和CD9）、热休克蛋白家族（HSP60,HSP70和HSP90），本示踪病毒使用CD63作为生物标记，通过将CD63与荧光蛋白偶联，带荧光的膜蛋白会在表达至外泌体膜上，便于后续进行、观察内化或其他实验。慢病毒载体的构建原理就是将HIV21基因组中的顺式作用元件(如包装信号、长末端重复序列)和编码反式作用蛋白的序列进行分离。细胞上清外泌体Dil症状细胞来源的外泌体含有与症状进展相关的分子。

所有真核细胞类型包括造血细胞、上皮细胞、神经细胞、干细胞、脂肪细胞和病症细胞均可在培养条件下分泌外泌体。体内所有体液，包括血液、唾液、脑脊液、腹水，甚至尿液中都可以分离得到外泌体。这些外泌体传输多种信号分子，包括蛋白质、信使核糖核酸（mRNA）和非编码核糖核酸（RNA），其携带的分子可以被其他细胞吸收。因此，外泌体可以将生物信息转移到相邻细胞。这种细胞间通信不只涉及生理功能，还涉及一些疾病的发病机理，包括瘤、心血管疾病和神经退行性疾病等。

胃病作为一种常见的恶性瘤,在亚洲具有较高的发病率.胃病的临床诊断方法与结肠病相同,主要依靠内窥镜,早期胃病的症状并不明显,且临床常用的瘤标志物对胃病患者特异性与敏感性均较差,因此,胃病往往发现于晚期,并伴有不同程度的转移。研究者发现胃病细胞高表达CD97并可经外泌体分泌的方式调节瘤细胞的MAPK信号通路,促进瘤细胞的增殖与侵袭。外泌体中CD97的检测成或许能成为一种有潜在价值的胃病诊疗工具。胃病细胞能选择性地将let-7包装到外泌体中,并释放至周围环境中,促进胃病的恶性进展。胃病细胞外泌体可作用于抗瘤的T细胞,抑制AKT的活性。外泌体与免疫细胞之间的相互作用揭示了瘤抑制免疫功能的潜在机制。在另一项被认为有潜在胃病诊断价值的lnRNA的研究中,通过对胃病患者、胃上皮异型增生与健康人的比较发现,LINC00152在胃病患者的血液中可被检测到高表达,且手术前后有明显变化。血清LINC00152主要存在于外泌体中,在外泌体的保护下,可以稳定保存,血清外泌体LINC00152具有胃病标志物的潜能。外泌体能向病变细胞输送功能性物质，所以有很大潜力作为基因和药物递送的载体。

唾液中包含来自于唾液腺上皮体外细胞的外泌体，Michael等从唾液中提取外泌体，并对唾液外泌体中的miRNA进行分析，发现此类miRNA有望作为成为唾液腺疾病的生物标志物。Wu等成功从汗液中提取得到外泌体，并进行蛋白质组学分析，在汗液外泌体中鉴定到1062种蛋白质，其中包含多种抗jun肽和免疫因子，表明汗液外泌体参与皮肤免疫。Liu等从患有阿尔兹海默症患小鼠的脑脊髓液中提取得到外泌体，并与野生型小鼠进行对比，发现实验组miR-193b明显下调。干细胞外泌体可用于中风的治理，改善神经预后，增加血管与神经生成。细胞上清外泌体Dil

外泌体作为细胞间信号传导的通讯工具和作为病等各种疾病的生物标记话题比较热门。血浆外泌体提取方法

外泌体特指直径在30-150nm的囊泡，其主要来源于细胞内多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族（CD63,CD81和CD9）、热休克蛋白家族（HSP60,HSP70和HSP90），本示踪病毒使用CD9作为生物标记，通过将CD9与荧光蛋白偶联，带荧光的膜蛋白会在表达至外泌体膜上，便于后续进行、观察内化或其他实验。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有ganran力的病毒颗粒，通过ganran细胞或组织，实现外源基因在细胞或组织中表达。血浆外泌体提取方法