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湖北外泌体iTRAQ

来源: 发布时间:2023年08月27日

获得囊泡粒径分布的两种方法动态光散射(DLS)和纳米颗粒跟踪分析(NTA)都被广fan应用于外泌体颗粒数目和粒径分布的测量,但两种方法也各有不足。动态光散射法中散射光强度依赖于颗粒质量(体积),混合体系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)将严重影响测量结果,因此动态光散射法更适用于单分散体系。而且动态光散射法所得的结果强烈依赖于所应用的数学算法。而采用纳米颗粒跟踪分析仪对不同粒径范围的囊泡进行检测时,为了得到准确的浓度和粒径信息,需要根据所要测量的颗粒粒径范围对仪器分别校准,操作繁琐。受检测灵敏度所限,纳米颗粒跟踪分析仪适用于粒径范围50nm~1μm的颗粒,粒径小于50nm的外泌体无法检测。除此之外,两种方法都依赖光散射和粒子的布朗运动进行分析,难以区分合成的纳米材料、大蛋白质聚合体和生物囊泡。细胞分泌到细胞外环境中分别称为外泌体和微泡的细胞外膜泡。湖北外泌体iTRAQ

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外泌体(Exosome)开始被认为是毫无作用的“垃圾”,但随着研究的不断深入,人们发现事实并非如此,外泌体(Exosome)是具有功能活性并可进行细胞间信息传递的微囊泡。外泌体(Exosome)介导瘤细胞的免疫耐受。瘤细胞来源的外泌体(Exosome)本身可作为瘤抗原,因此,瘤来源的外泌体(Exosome)既是一种抗原呈递系统,同时也是瘤排斥抗原的来源。瘤来源的外泌体(Exosome)能够通过传递某些抑制信号,在机体免疫应答过程中起负性调节作用,诱导瘤细胞形成免疫耐受,从而逃避免疫细胞的杀伤。湖北外泌体iTRAQ外泌体中含有丰富的蛋白质和遗传物质DNA以及RNA等。

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外泌体起源于多泡体,以细胞管腔内囊泡的形式存在.细胞的胞吞形成带有外源性抗体的内体小泡,在高尔基体等细胞器的作用下形成早期核内体,早期核内体的囊膜内陷、突入形成多个小囊泡,并选择性的接受细胞内的蛋白质、核酸、脂类等成分,较终形成晚期核内体,晚期核内体与细胞膜融合,并将外泌体排出胞外。这是一个连续而又复杂的过程,从内体小泡到成熟外泌体,需要在各细胞器间传递并包装,包括:TSG101、Alix蛋白、CD63、CD81、神经酰胺、胆固醇等。外泌体的排出跟其他胞内小泡大致相同,受到Rab家族蛋白的调控,敲除细胞的Rab27a和Rab27b蛋白后,外泌体不能排出,且从高尔基体到晚期核内体的囊泡运输不受影响。

通过对28例前列腺ai症患者和19例正常人尿液外泌体中的miRNA进行深度测序分析,发现两种miRNA(miR-196a-5p和miR-501-3p)在前列腺ai患者组明显下调,表明尿液外泌体中的特异性miRNA可能作为前列腺ai的新型生物标志物。Khurana等[100]将研究对象由miRNAs扩大至多种类型RNA,通过对慢性肾病患者尿液外泌体中各类RNA进行系统研究,在慢性肾病患者组中识别出30种明显差异的lncRNAs,表明尿液外泌体中的lncRNAs具有作为慢性肾病早期诊断标志物的潜力。Skotland等的研究则表明尿液外泌体中的脂质能够作为前列腺ai的新型标志物,3种脂质标志物结合使用能够有效提高对前列腺ai的诊断灵敏度(93%)和特异性(100%)。泌体是细胞内源性的小囊泡,由大多数细胞分泌。

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外泌体不只可作为疾病诊断的生物标志,而且可作为天然的药物传递载体。外泌体能够负载的治理物质包括小分子化合物、蛋白质、寡核苷酸等,且在体液中宽泛分布且具有定向归巢能力。外泌体独特的生物兼容性、高稳定性、瘤靶向性使其在未来瘤治理中有很大的利用价值。外泌体能够装载的治理物质包括小分子化合物、蛋白质、寡核苷酸等。作为小分子化合物载体,外泌体装载姜黄素、紫杉醇、阿霉素等主要是用于抗瘤研究;已经发现外泌体可递送多种蛋白质,例如酶,细胞骨架蛋白质和跨膜蛋白质;外泌体作为核酸分子的药物载体主要用于基因治理,外泌体天然的可以携带遗传(例如miRNA,siRNA)到靶细胞中,从而在生物学和致病过程中诱导遗传修饰。外泌体的异质性决定了外泌体药物递送系统要根据所传递治理物质的类型、目标组织的特点等进行针对性的调整。乳液提取试剂盒原理

PS亲和法提取的外泌体,其蛋白特异性检测可高出10~100倍以上。湖北外泌体iTRAQ

外泌体(Exosome)介导瘤细胞的增殖过程。瘤细胞通过与自身微环境的信息交流促进瘤细胞的增殖,而外泌体(Exosome)可以充当这种信息载体。当细胞中出现基因突变时,外泌体(Exosome)会通过膜融合把这种突变信息传递至其他的正常细胞,从而导致原病基因的唤醒、抗凋亡基因的表达,使瘤细胞获得增殖特性。瘤细胞来源的外泌体(Exosome)还可以通过直接抑制免疫细胞,促进瘤细胞逃避免疫监视,为瘤细胞在体内生长创造条件。然而,虽然当前外泌体生物学仍然不成熟,但越来越多的兴趣和资金投入必将加速外泌体基础研究进展和临床转化。湖北外泌体iTRAQ

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