外泌体(exosomes)是一类由细胞分泌到胞外的囊泡。与其他两种胞外囊泡(微囊泡和凋亡小体)相比,外泌体在产生方式、尺寸、密度和内容物等方面存在明显差异。不同于微囊泡“出芽”的形成方式,外泌体主要通过胞吐过程释放至细胞外:首先细胞膜向内凹陷形成早期核内体(earlyendosomes),早期核内体进一步内陷形成多泡体(multivesicularbodies,MVBs),其中一部分多泡体与溶酶体(lysosome)融合,进而降解;另一部分与细胞膜融合,将其内部所包含的囊泡释放至胞外,即为外泌体。外泌体具有独特的物理化学性质,其直径为30~200nm,密度为1.13~1.19g/mL,组成包括细胞来源相关的脂质、蛋白质、RNA、DNA等物质,在其表面连接有大量的糖链,如甘露糖、聚乳糖胺和α2,6-唾液酸等。PS亲和法提取的外泌体,其蛋白特异性检测可高出10~100倍以上。外泌体鉴定nta技术
液体活检是一种非侵入性的血液检测突破性技术,能早期快速地检测中流及其病灶或者转移过程中释放到血液中的循环中流细胞(circulatingtumorcell,CTC)、循环中流DNA(circulatingtumorDNA,ctDNA)和中流外泌体等中流组分。中流外泌体作为液体活检的一个重要组成,基于其内容物成分多样和稳定等优势,正成为中流标志物相关研究的热点。中流来源纳米大小的外泌体具有易通过血脑屏障、天然的归巢特性、双分子层脂质结构的稳定性和高效的生物相容性等特征。因此,中流外泌体正成为中流靶向zhiliao理想的载体,尤其是工程化外泌体更表现出很好的中流靶向干预和增强药物zhiliao的效果。外泌体鉴定nta技术外泌体普遍存在于细胞培养上清以及各种体液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等。
外泌体是各种细胞外泌的直径在30-100nm之间的膜囊泡。因外泌体内含mRNA、microRNA等核酸和蛋白质对相邻细胞具有交换信息的功能。作为细胞间信号传导的通讯工具和作为病等各种疾病的生物标记话题比较热门。近些年关于外泌体研究很普遍,但是关于外泌体相关的实验技术,关于需要改进的课题存在很多。例如,外泌体提纯方法中,超速离心法和聚合物沉淀法(市售试剂盒)混入多种杂质,给后续实验产生了许多障碍。抗体亲和法和密度梯度离心法,虽然可以提取到高纯度的外泌体,但不能提取完整外泌体,无法分析外泌体具有的生理功能,也是两种提取方法的问题所在。而免疫印迹法(WB)和Elisa检测法作为被普遍应用的外泌体检测的一般方法,又存在检测时需使用大量外泌体和难以检测到低表达水平的标记蛋白。
与正常细胞相比,中流细胞外泌体的分泌量增多,内容物也存在明显差异。由于囊泡结构的保护,中流细胞来源的外泌体内携带有大量中流细胞来源的活性生物分子,其特点包括:(1)提供具有稳定构象的蛋白质分子;(2)保持蛋白质的生物活性;(3)携带其中的生物分子经体液运输至远端qi官;(4)膜融合的作用方式使得中流细胞来源的外泌体能够与靶细胞之间进行更有效的信息交流。外泌体介导中流转移:体外研究和体内成像实验表明恶性中流细胞产生的外泌体可以在全身水平上被同一中流或远端中流中恶性程度较低的ai细胞摄入,其内所包含的与转移相关的mRNAs进入转移性较低的细胞后,能够增强其转移能力。在免疫系统中,据报道趋化因子受体CCR5通过外泌体在细胞之间转移是细胞人类免疫缺陷病毒传染的一种机制。
妊娠期间胎盘可释放外泌体到全身循环系统,参与妊娠期间母胎界面的免疫调节、子宫螺旋动脉重塑和胎盘屏障的形成等重要事件调控,在正常妊娠过程维持中发挥重要作用。而很多妊娠并发症,如子痫前期等胎盘功能紊乱相关疾病的发生,很可能与胎盘来源外泌体异常密切相关。目前外泌体分离方法主要包括:多步差速离心、蔗糖密度梯度离心、试剂盒沉淀、免疫磁珠分选、色谱法、过滤离心等方法。其中,多步差速离心是制备外泌体的经典方法,该方法是根据外泌体的沉降系数差速离心将其分离出来,然而妊娠期母血清中除含有胎盘组织释放的外泌体,还包括许多其他种类细胞释放的外泌体,如树突状细胞、淋巴细胞等,且血清中可能还存在一些大小类似的物质混杂其中,这些因素都会影响胎盘来源外泌体的分离纯化。随着今后的研究发展,外泌体功能逐步清晰,并扩大临床应用。外泌体鉴定nta技术
外泌体的提取的方式:密度梯度离心法。外泌体鉴定nta技术
外泌体的组成较为复杂,其内含有多种生物大分子,如:核酸(双链DNA和各种RNA亚型)、蛋白质和脂质。这些分子被外泌体携带进入血液循环,而后被靶细胞吸收,从而调节靶细胞基因表达和细胞功能。此外,外泌体相关的miRNA作为短单链和非编码RNA分子,调节致病基因或抑病基因的表达,参与细胞分化、细胞凋亡及细胞信号的传导。有研究表明,外泌体能影响种瘤微环境的形成、增强种瘤细胞的侵袭和转移能力、介导种瘤免疫压制及参与种瘤放化疗抵抗进而促进种瘤的发展。外泌体鉴定nta技术
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