HEPES缓冲体系在生物化学和细胞生物学研究中扮演着至关重要的角色。以下是对HEPES缓冲体系的详细介绍:一、定义与组成HEPES,全称为N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙烷磺酸,是一种非离子两性缓冲剂。它能够在不同的pH条件下平衡氢离子浓度,从而维持溶液pH的稳定。二、特性与优势***的缓冲范围:HEPES的有效缓冲范围在pH6.8~8.2之间,覆盖了大多数生物实验和细胞培养所需的pH环境。CO2无关性:与许多其他缓冲液不同,HEPES的缓冲能力不受CO2浓度的影响,这使得它在开放式培养或细胞观察等实验中具有独特的优势。低毒性:在适当浓度下,HEPES对细胞无毒性作用,能够为细胞提供一个安全的生长环境。稳定性强:HEPES不易受温度、光照和化学物质的影响,适合长期实验和储存。膜不透性:HEPES具有膜不透性,不会***改变细胞的渗透压,避免了对细胞形态和功能的不良影响。注射用HEPES CDE已登记登记状态为A;上海采购HEPES现货
使用注意事项pH调节:在配制HEPES溶液时,需要准确调节pH值至适合细胞生长的范围内。浓度控制:根据实验需求和细胞类型,严格控制HEPES的浓度,避免过高或过低。一般来说,HEPES的使用终浓度为10~50mmol/L,其中20mmol/L HEPES足以满足大多数细胞培养的缓冲需求。避光操作:由于HEPES暴露于光线中时会产生过氧化氢,对培养的细胞或其他有生物活性的物体产生毒性,因此HEPES作为缓冲液的操作应尽量在避光条件下进行。与其他成分的兼容性:在配制细胞培养基时,需要注意HEPES与其他成分的兼容性。长期稳定性:配制好的HEPES溶液需要存放在适当的温度下,确保其长期稳定性。综上所述,HEPES作为一种高效、稳定的缓冲液,在细胞培养和其他生物化学研究中发挥着重要作用。通过合理控制HEPES的浓度和配制方法,可以维持细胞培养环境的pH稳定,提高细胞的生长和代谢效率。上海采购HEPES现货注射用HEPES国产缓冲液CDE已登记企业询价。
Tris-HCL与HEPES(供注射用)缓冲液应用对比
**常用的缓冲液有很多,如磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、HEPES缓冲液、氨基酸缓冲液等。不同的缓冲液差别液很大,***主要来对比两种**常用的缓冲液:Tris-HCl缓冲液与HEPES缓冲液各自的应用对比。
1、Tris-HCl缓冲液的应用Tris常用于蛋白或者核酸的缓冲液,其在电泳缓冲液中与甘氨酸构成缓冲体系,稳定电泳过程中的pH,由于其具有弱碱性,水溶液的pH在10.5左右,可通过添加HCl或者NaOH制备不同pH的缓冲液,根据缓冲理论,Tris缓冲液的有效范围通常是pH7.0-9.2之间。此外,Tris还可以制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物(磷霉素等)的中间物,在化妆品、医药、涂料以及合成中均有应用。应用于体内时,Tris作为一种不含钠的氨基缓冲碱,在体液中与H2CO3结合,生成碳酸氢盐。因此它能缓冲酸,而且能降低CO2张力,有纠正急性呼吸性酸中毒和代谢性酸中毒双重效果,其作用较碳酸氢钠快而强。HEPES缓冲液对细胞无毒性作用,它是一种氢离子缓冲剂,能较长时间控制恒定的pH范围。使用时浓度为10-50mmol/L,一般培养液内含20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。在体外诊断、DNA/RNA提取、脂质体药物等方面均有应用。
HEPES(4-2-羟乙基醇-1-哌秦基-乙磺酸) 分子量为238.31,化学名:4-羟乙基哌口秦乙磺酸,分子式: C8H18N2O4S。HEPES是制备缓冲液的有机物质,为非离子两性缓冲液,在pH 7.2 - 7.4范围内具有很好的缓冲能力。 ***用于细胞培养,为了维持稳定的生理pH值,20下的pKa为7.55。 HEPES用于保护冷冻酶溶液免受冷冻诱导的pH变化的影响。 考虑到HEPES的光毒性(暴露于环境光会产生过氧化氢),该缓冲剂配置溶液后,保存在黑暗的环境中,以便在后续实验中正常工作。GMP条件下生产AVT注射级HEPES。
对细胞的保护作用降低细胞毒性:某些化学物质在培养基中容易产生细胞毒性,影响细胞的生长和繁殖。HEPES能够降低这些化学物质的细胞毒性,从而保护细胞免受损伤。形成保护层:HEPES分子还可以通过吸附在细胞表面,形成一层保护层,减少细胞间的摩擦和碰撞,降低细胞的损伤风险。这有助于提高细胞的生存率和实验结果的可靠性。综上所述,HEPES在细胞培养中发挥作用的主要原理是通过其两性离子特性增加溶液离子浓度和渗透压,以及通过其稳定的缓冲能力维持细胞生长所需的pH环境。此外,HEPES还能降低细胞毒性、形成保护层等,对细胞具有保护作用。这些特性使得HEPES成为细胞培养中不可或缺的缓冲剂之一。AVT稳定供应注射级海藻糖、蔗糖、TRIS/TRIS-HCl、HEPES等生物保护剂与缓冲盐。上海采购HEPES现货
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在流式细胞术中的优化HEPES(10 mM)可维持细胞悬液pH稳定,减少荧光染料淬灭。但需与FBS或BSA联用以防止非特异性结合。HEPES缓冲液能减少细胞聚集,提高流式分析的准确性。在长时间流式实验中,HEPES可替代碳酸氢盐缓冲液,避免因CO2逸出导致的pH漂移。HEPES的低离子强度特性减少了对细胞膜的损伤。HEPES缓冲能力在4-37℃范围内变化<10%,优于Tris缓冲液。但高温(>50℃)会导致降解,需避免高压灭菌。HEPES在低温下仍保持良好缓冲能力,适合冷库或冰上操作。在热稳定性实验中,HEPES缓冲液能有效维持反应体系的pH稳定。但需注意HEPES在高温下的降解产物可能干扰实验结果。上海采购HEPES现货