显色反应是将酶催化转化为可检测信号的关键步骤,需要精确控制。·底物准备:按说明书要求配制或平衡底物溶液(TMB通常需平衡至室温,避免低温影响反应速率)。避光保存(尤其TMB对光敏感)。确保底物新鲜,无沉淀或变色。·加底物:使用多通道移液器或排***快速、均一地向所有孔加入等量底物(避免产生气泡)。记录准确的加底物时间点,因为反应是动态进行的。·避光孵育:将微孔板置于暗处(或盖上避光盖)按说明书要求的时间(通常5-30分钟)和温度(通常是室温或37°C)进行孵育。显色时间对结果影响很大,时间过短信号弱,时间过长可能饱和或背景升高。如需精确控制,可设置定时器。·终止反应:当阳性对照孔显色达到预期(如TMB显蓝色,标准曲线梯度明显)或达到预定时间时,立即按相同顺序和速度向每孔加入终止液(如HRP-TMB系统用1M或2MH₂SO₄)。终止液会改变pH,使酶失活并稳定颜色(如TMB变黄)。加入终止液后,颜色会迅速变化并稳定下来(但仍建议尽快读数)。·读数窗口:终止后,应在说明书规定的时间内(通常5-30分钟内)完成吸光度读数。放置时间过长,颜色可能缓慢褪去或沉淀,影响准确性。多克隆抗体包被的试剂盒检测范围更广。上海国产ELISA试剂盒销售价格
在检测系统集成方面,现代ELISA检测正向"样本进-结果出"的全自动化方向发展。以西门子ADVIA Centaur XP、雅培Architect i2000SR等全自动化学发光免疫分析系统为**,整合了样本前处理、试剂存储、温控孵育、信号检测和数据分析等完整流程,真正实现了检测过程的无人化操作。这些系统通常配备智能软件管理系统,可自动进行质控监测、结果判读和数据存储,确保检测结果的可追溯性。未来,随着人工智能算法的引入,ELISA检测系统将具备更强的异常结果识别能力和自动优化功能,进一步推动免疫检测技术向智能化方向发展。上海国产ELISA试剂盒销售价格自动化洗板机可提高大规模检测的重复性。
***是内分泌腺或细胞分泌的、通过血液循环作用于靶***的化学信使。准确测定***水平对于内分泌疾病的诊断、***监测和生理研究至关重要。ELISA是临床和科研中检测多种***的主流技术。·检测对象:血清、血浆、尿液(如24h尿皮质醇)中的肽类/蛋白类***和部分小分子类固醇***(需竞争法)。o肽类/蛋白类***:胰岛素、C肽、胰***素、生长***(GH)、促肾上腺皮质***(ACTH)、促甲状腺***(TSH)、黄体生成素(LH)、卵泡刺***(FSH)、泌乳素(PRL)、甲状旁腺***(PTH)、降钙素等。通常使用夹心法。o类固醇***:皮质醇、睾酮、雌二醇(E2)、孕酮(P)、脱氢表雄酮(DHEA-S)、25-羟基维生素D等。由于是小分子,主要采用竞争法ELISA。也可检测尿液中的***代谢物(如雌三醇)。
酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)是现***物医学研究和临床诊断中不可或缺的基石技术之一。其**原理是利用抗原-抗体特异性结合的高亲和力与酶催化的高效信号放大作用相结合。简单来说,就是将待测物(抗原或抗体)特异性吸附(固定)在固相载体(通常是96孔聚苯乙烯微孔板)表面,然后加入酶标记的抗体或抗原进行特异性识别结合。洗去未结合的物质后,加入该酶的相应底物。酶催化底物发生显色、发光或荧光反应,产生的信号强度与待测样品中目标分子的含量在一定范围内呈正相关(或负相关,取决于检测模式)。通过测量吸光度、发光值或荧光强度,并与已知浓度的标准品绘制的标准曲线进行比较,即可对待测样品中的目标物进行定量或定性分析。这种巧妙的设计赋予了ELISA极高的灵敏度和特异性,使其能够检测极低浓度(皮克甚至飞克级别)的生物分子。ELISA试剂盒是一种基于酶联免疫吸附原理的高灵敏度检测工具。
过敏性疾病(如过敏性鼻炎、***、特应性皮炎、食物过敏)日益普遍。ELISA在过敏原检测中扮演着双重角色:1.检测血清中过敏原特异性IgE(sIgE):o这是体外诊断I型(速发型)过敏反应的金标准方法之一(另一种是免疫印迹/芯片)。o原理:将纯化的或重组的单一过敏原(如尘螨Derp1、花生蛋白Arah2、猫毛蛋白Feld1)包被在微孔板上(或使用多孔板同时检测多种过敏原)。加入患者血清,如果血清中含有针对该过敏原的sIgE抗体,则与之结合。洗涤后,加入酶标记的抗人IgE抗体(二抗),形成“固相过敏原-sIgE-酶标抗IgE”复合物。显色后信号强度与sIgE含量成正比。o优势:可定量或半定量报告sIgE浓度(kU<sub>A</sub>/L),帮助确定致敏程度;检测不受药物(如抗组胺药)影响;安全性高(无需激发试验)。o应用:辅助诊断特定过敏原诱发的过敏性疾病,识别交叉反应性,监测******效果。o局限性:sIgE阳性*表示致敏(Sensitization),不一定等同于临床过敏(Allergy),需结合病史解读;无法检测非IgE介导的过敏反应;检测种类受限于包被的过敏原。部分标志物检测试剂盒已获CFDA认证。上海国产ELISA试剂盒销售价格
部分ELISA试剂盒可检测磷酸化蛋白修饰水平。上海国产ELISA试剂盒销售价格
随着移动医疗技术的进步,智能手机与微型ELISA装置的结合为家庭自测提供了新思路。例如,用户可通过手机摄像头拍摄试纸条的显色结果,配合**APP进行图像分析(如RGB值测量),实现半定量检测。部分研究团队还开发了便携式微流控ELISA芯片,*需一滴血或唾液即可完成检测,并通过蓝牙将数据传输至手机,便于远程医疗咨询。这类技术特别适用于慢性病监测(如糖尿病、心血管标志物检测)和传染病筛查(如流感、HIV自检),有望降低医疗成本并提高疾病管理的便捷性。上海国产ELISA试剂盒销售价格