从膜的质地上来看,较重要的指标就是单位面积上能够结合的蛋白的量。硝酸纤维素膜(NC膜)的结合能力主要与膜的硝酸纤维素的纯度有关,市场上有些硝酸纤维素膜(NC膜)通常会还有大量的醋酸纤维素,因而降低了蛋白的结合量。如果采用的是100%纯度的硝酸纤维素, 保证了较大的蛋白结合量,可达80-150μg/cm2。由于100%的纯度,因而也有效减少了非特异性的结合,降低杂交背景,无需高严谨度的洗脱步骤。其次,膜的强度和韧性也是需要考虑的因素。常规的硝酸纤维素膜比较脆,漂洗一两次就会破损,不能反复使用。PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。PVDF转印膜材料具有良好的温度稳定性。河南PVDF转印膜厂家电话
降解法测序实验中,经过SDS-PAGE电泳分离后的蛋白质样品需经过“转膜”步骤,从PAGE胶转移到PVDF膜上固定,才能接着使用Edman降解法进行下一步的测序。转膜是将蛋白胶上的样品转移至PVDF膜上,是Edman降解法测序样品准备过程,这是对之后的测序结果影响较大的一步,转膜质量的好坏直接决定了测序的数据分析结果。因此,Edman转膜步骤不容忽视。为了防止没有电场的情况下已经分离的蛋白条带扩散,转膜要尽快进行,其具体操作如下所述:1、PVDF膜处理:取出PVDF膜,用甲醇浸泡数秒钟后放入CAPS电印迹缓冲液中防止膜干涸;|2、凝胶处理:将电泳凝胶取出放入电印迹缓冲液中处理5-10分钟。上海PVDF转印膜在哪买PVDF转印膜能够满足不同需求的转印工艺。
硝酸纤维素膜(NC膜)是蛋白印迹实验的标准固相支持物。在低离子转移缓冲液的环境下,大多数带负电荷的蛋白质会与硝酸纤维素膜发生疏水作用而高亲和力的结合在一起,虽然这其中的机制还不是十分清楚,但由于硝酸纤维素膜(NC膜)的这个特性,而且易于封闭非特异性结合,从而得到了普遍的应用。在非离子型的去污剂作用下,结合的蛋白还可以被洗脱下来。根据被转移的蛋白分子量大小,要选择不同孔径的硝酸纤维素膜(NC膜)。因为随着膜孔径的不断减小,膜对低分子量蛋白的结合就越牢固。但是膜孔径如果小于0.1mm,蛋白的转移就很难进行了。
硝酸纤维素膜/PVDF膜:用于蛋白免疫印迹的固相载体有多种,硝酸纤维素膜及PVDF(聚亚乙烯双氧化物)膜较为常用。硝酸纤维素膜具有结合 能力强,膜不需要活化,背景浅,能进行多次免疫检测并且功能基团寿命长等优点,但极易破碎不易操作。PVDF膜在制备多肽供蛋白质化学分析中较为常用。它 具有较强的蛋白质结合能力和高信噪比,所以不会因为重复使用探针而使蛋白质丢失。另外,膜的开放孔结构使其更容易与被吸附的蛋白质结合。可用于Western杂交、dot/slot 杂交、蛋白质测序、以及MS分析。适用于Southern/Northern/Dot/Slot Blot/Colony Lift实验和Western、蛋白质测序以及MS分析。PVDF转印膜的使用寿命长,不易退色和剥落。
大家较关心的可能就是希望获得一个性能优良的配方,包括缓冲液,封闭液等等处理溶液配方.其实我也无法提供给你一个万用配方清单. 因为不同的反应体系需要不同的配方来支持, 而不同机构的反应体系又有差异. 想获”鱼”先学”渔”. 为了不误导大家,我在下面涉及到配方的问题上,只提供思路,具体配方请自己摸索.缓冲液的构成一般是: PBS(或其他缓冲体系)+作用物质(针对某一特定问题)+PH调整. 我在参考过以前的各种资料后,个人意见为配方原则为宜简不宜繁,根据自己的需要添加作用物质,原来的很多需要添加的作用物质,由于膜制造技术的改进已经不再需要.推荐的缓冲体系为0.01M PBS PH7-7.2, 该缓冲体系对多种抗原抗体都有良好的适应性。使用PVDF转印膜具有高覆盖率和高保真度。江苏纯硝酸纤维素膜生产厂商
PVDF转印膜具有出色的粘附性能。河南PVDF转印膜厂家电话
其实我们并没有那么多选择。经过使用实践,各供应商一般都只提供两个型号,就是135s和180s。虽然看到有些厂家的产品目录上型号种类繁多,但这两个型号的定货量就占了95%以上,其他型号供货上也就远不如这两个型号来得顺利。135s一般用在双抗体夹心法,180s一般用在竞争法. 你所要做的是,先选择其中的一个型号, 然后比较不同供应商同一个型号的差异,由于前面说的添加配方与你的试验条件配合的不同,这个差异可能大也可能小。具体要根据试验结果来确定之后的选择。我个人不建议地毯式的测试不同规格/不同厂家的膜,这样成本高,成功的几率也小。河南PVDF转印膜厂家电话