在肾小球疾病中,不同类型的肾小球肾炎有着各异的免疫病理特征。以膜性肾病为例,我们可以用多重免疫荧光技术,用一种颜色标记肾小球基底膜上的足细胞标志物,如足细胞蛋白;用另一种颜色标记免疫复合物中的主要成分,如IgG;再用第三种颜色标记补体成分C3。这样在肾小球组织切片上就能够清晰地看到足细胞的损伤情况、免疫复合物的沉积部位以及补体***的状态。在肾小管-间质性肾炎的研究中,多色免疫荧光同样发挥重要作用。我们可以用不同颜色标记肾小管上皮细胞、肾间质中的炎症细胞以及与炎症反应相关的细胞因子。例如,用绿色荧光标记肾小管上皮细胞中的特定转运蛋白,红色荧光标记肾间质中的淋巴细胞,蓝色荧光标记白细胞介素-1β(IL-1β)。通过观察这些标记成分的分布和变化,可以深入研究肾小管-间质性肾炎的发病机制,包括肾小管上皮细胞的功能损伤、炎症细胞的浸润以及炎症因子的作用机制。免疫荧光技术在免疫学研究中发挥重要作用,帮助揭示细胞和分子的功能和相互关系。CY3免疫荧光IF
在慢性阻塞性肺疾病(COPD)的研究中,多重免疫组化有助于剖析疾病的病理生理过程。可以标记气道上皮细胞的标志物,如细胞角蛋白,同时标记炎症细胞的标志物,如 CD8 + T 细胞、巨噬细胞和肥大细胞,以及与气道重塑相关的生长因子,如转化生长因子 - β1(TGF - β1)。在 COPD 患者中,气道炎症和重塑是主要特征。通过观察这些标志物的变化,可以了解气道上皮细胞的损伤情况、炎症细胞在气道中的浸润和分布,以及 TGF - β1 是如何促进气道平滑肌细胞增殖和细胞外基质沉积,导致气道重塑的。公司免疫荧光分析免疫荧光技术可以用于研究细胞内蛋白质的定位和表达水平。
细胞爬片的免疫荧光步骤基本一致:1. 取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里,PBS洗三遍。注意:有的时候作的细胞爬片可能比较小,因此夹取的时候要小心,注意 反正面,放在皿里洗比较方便,避免了来回夹取,另外洗的时候加PBS不要太冲,不要细胞冲下来。洗的时候我都是多加PBS,稍晃一下就倒掉,没有等5分钟或10分钟。2. 4%冷的多聚甲醛固定20分钟,PBS洗三遍。3. 0.2%Triton X-100通透10分钟,PBS洗三遍。4. 与二抗相同宿主的血清封闭30分钟,PBS洗三遍。5. 一抗4度湿盒内过夜,也可37度2小时,感觉前者效果好,PBS洗三遍。6. 二抗室温2小时(避光),或者37度1半小时,PBS洗三遍。7. 较好用DAPI染核,然后直接照荧光片。8. 蒸馏水洗掉PBS,甘油封片,指甲油封片子的四周,因为甘油不象树脂那样会干,所以不用指甲油封的话会弄的一塌糊涂。
免疫荧光的原理:免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。直接法:将标记的特异性荧光抗体,直接加在抗原标本上,经一定的温度和时间的染色,用水洗去未参加反应的多余荧光抗体,室温下干燥后封片、镜检。免疫荧光技术可以用于研究细胞凋亡和细胞存活。
免疫荧光像是一位精细的画家,能够细致地描绘出细胞结构的每一个细节。在细胞器研究中,以线粒体为例。通过免疫荧光标记线粒体的特定蛋白,如细胞色素c氧化酶等,在显微镜下可以清晰地看到线粒体的形态、大小和分布。这不仅有助于研究线粒体本身的功能,如能量代谢,还能观察线粒体在细胞生理和病理状态下的变化。例如,在细胞凋亡过程中,线粒体的形态和膜电位会发生改变,免疫荧光可以实时监测这些变化,为研究细胞凋亡机制提供直观的证据。在细胞核结构研究方面,免疫荧光可以标记核孔蛋白、组蛋白等,从而展现出细胞核的核膜、染色质等结构。这对于理解基因表达调控、DNA复制等核内过程有着重要意义。免疫荧光技术可以用于研究神经系统的功能和疾病。CD14免疫荧光
免疫荧光技术可以用于研究细胞内蛋白质的亚细胞定位。CY3免疫荧光IF
在视网膜疾病的研究中,视网膜是一个结构复杂且功能精细的组织。例如在年龄相关性黄斑变性(AMD)的研究中,我们可以用不同颜色的荧光标记视网膜色素上皮细胞、光感受器细胞、血管内皮细胞以及与疾病相关的生物分子。如用绿色荧光标记视网膜色素上皮细胞中的视黄醛结合蛋白,红色荧光标记光感受器细胞中的视锥视杆细胞连接蛋白,蓝色荧光标记血管内皮生长因子(VEGF)。通过这种方式,可以在视网膜组织切片上直观地看到AMD发病过程中这些细胞和分子的变化,如视网膜色素上皮细胞的萎缩、光感受器细胞的损伤以及新生血管的形成与VEGF的关系。在青光眼的研究中,多色免疫荧光可用于标记视神经**的神经纤维、筛板组织以及眼压相关的分子。用一种颜色标记神经纤维,另一种颜色标记筛板细胞,再用其他颜色标记与眼压调节有关的蛋白。这样可以观察到青光眼患者视神经**结构的改变、神经纤维的损伤与眼压变化之间的关系,有助于提高青光眼诊断的准确性并深入理解其发病机制。CY3免疫荧光IF