ki67免疫荧光IF

细胞免疫荧光实验注意事项：1、建议细胞直接种孔板，采用倒置荧光显微镜拍照，这样可以避免然后挑片时造成划片或细胞片破损以及然后封片可能造成滑片等结果；2、若实验室只有正置荧光显微镜，则需要将细胞植于细胞爬片。建议直接购买处理过的细胞爬片；若只有普通细胞爬片，可以先将爬片于浓酸（浓酸腐蚀性强，注意操作）或 75% 乙醇浸泡过夜，若用酸浸泡过夜，第二天先用自来水小心冲洗掉爬片残留的酸液，若用 75% 乙醇浸泡，则不需要此步骤。然后，用洗洁精搓洗爬片，然后用去离子水清洗爬片。置于烘箱 80 ℃ 烘干，再将爬片置于超净台造紫外消毒后备用。免疫荧光技术具有高灵敏度和高特异性，可以检测非常低浓度的目标分子。ki67免疫荧光IF

细胞免疫荧光实验注意事项：根据所检测抗原所在位置来确认是否需要加入 Triton 进行通透。若所检测抗原表位位于膜蛋白的白外段，则不需要通透；一般 5% BSA 封闭即可达到效果；从加荧光二抗起，后面所有操作步骤尽量避光。缩短在荧光显微镜下的观察时间，1~2 h 为宜。染色后尽快荧光显微镜下观察，若不能可放入 4 ℃ 冰箱避光保存一周。无/弱染色：烤片温度过高，推荐 56~60 ℃ 1~2 h；一抗是否适用固定液和石蜡切片，使用浓度是否过低，孵育是否时间过短等。组织免疫荧光检查免疫荧光技术可以用于研究细胞迁移和细胞黏附。

细胞的固定及免疫荧光：1)吸除培养基，一般先加入PBS浸洗细胞 3 次，每次 5 min。2)向孔内加入4%多聚甲醛1ml，进行细胞固定，室温固定20分钟。3)吸去多聚甲醛，使用PBS浸洗 3 次，每次 5 min。4)向孔内加入0.5%Triton X-100(PBS配制)室温通透20min，目的是使细胞通透。5) 除去Triton X-100，使用PBS浸洗 3 次，每次 5 min。6)用10%的与二抗同源的山羊血清(PBS配制)或者5%BSA封闭2小时（选择的封闭液与后面操作过程中抗体稀释液一致）。封闭后不需要用PBS清洗。7)吸去封闭液，向每孔滴加足够量适宜浓度的一抗（一次使用抗体可以根据抗体说明书推荐浓度，后续实验可以摸索抗体的适宜浓度），4℃湿盒内孵育过夜。

zo-1的免疫荧光，步骤如下：1.细胞在盖片上生长融合到95%-100%时，从孵箱中取出。2.用预温的1×PBS洗3次，每次10分钟。3.4%的甲醛室温固定20-30分钟。4.1×PBS洗3次，每次10分钟。5.0.2%TritonX-100透化2-5分钟。6.1×PBS洗3次，每次10分钟。7.5%BSA室温封闭30分钟。8.加一抗（用1%BSA稀释）放在湿盒里，4度过夜。9.1×PBS洗3次，每次10分钟。10.加二抗(用1%BSA稀释)30分钟，闭光。11.1×PBS洗3次，每次10分钟。12.95%甘油封片。注：4%甲醛，0.2%Triton，5%BSA均用1×PBS稀释。荧光抗体技术可以用于检测和定位细胞或组织中的特定抗原物质。

免疫荧光技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。主要缺点是：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂。荧光免疫法按反应体系及定量方法不同，还可进一步分做若干种。与放射免疫法相比，荧光免疫法无放射性污染，并且大多操作简便，便于推广。国外生产的TDM用试剂盒，有相当一部分即属于此类，并且还有TDM荧光偏振免疫分析用的自动分析仪生产。由于一般荧光测定中的本底较高等问题，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。新发展了几种特殊的荧光免疫测定，与酶免疫测定和放射免疫分析一样，在临床检验中应用。免疫荧光技术是一种以荧光素标记抗体来定位抗原物质的高度发达的标记免疫技术。组织免疫荧光检查

免疫荧光在医学诊断中起着重要作用，可以用于检测病原体、肉瘤标志物等。ki67免疫荧光IF

细胞免疫荧光步骤对大家来说一定是很陌生的，他是一种抗原抗体反应，好像对我们来说他显得很遥远的样子，因为我们并不了解他能做什么，通过这种技术可以让我们对抗原或抗体的性质、定位一次来分析出更多的数据。细胞免疫荧光，这对很多人来说都是一次听说这个东西，也不知道他对我们会有什么好处与坏处，科学研究就是这样子的，普通老百姓是不会明白其中的道理的，但是这些研究也是确实的在我们的生活中取得了成果，能够让大家过的更加舒适。ki67免疫荧光IF

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