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MYeloperoxidase免疫荧光

来源: 发布时间:2023年07月25日

细胞的固定及免疫荧光:注意事项:(1)取细胞爬片时,动作应轻柔,防止将细胞爬片夹碎,影响实验进程。(2)种细胞过程中,要注意将细胞轻柔混匀,“八”字或者“十”字形摇晃,防止细胞局部生长过密。(3)稀释、加二抗(荧光抗体)及此后的洗涤过程中注意避光。(4)细胞爬片进行免疫荧光之后,需要尽快拍照,防止免疫荧光淬灭。或者放于暗盒内,暂时保存于4度冰箱,尽快拍照。(5)在进行荧光显微镜拍照时,要根据荧光抗体选择合适的激发光源。PI/DAPI能将凋亡和未凋亡的细胞都染成红色/蓝色,只在凋亡的细胞核中才有FITC-12-dUTP掺入而定位的绿色荧光。免疫荧光技术可以用于研究细胞内蛋白质的定位和表达水平。MYeloperoxidase免疫荧光

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免疫荧光通透(目的是使抗体进入胞内),0.5%TritonX-100(一种去垢剂,用PBS配制)室温通透20min(针对胞内抗原,若是细胞膜上表达的抗原则省略该步骤);除了TritonX-100,也可作为通透剂,并且固定后的样品不需要通透。封闭(减少一抗和二抗与非特异位点进行结合),通透后用PBS浸洗玻片3次,每次3min,吸水纸吸干PBS,在玻片上滴加山羊血清,室温封闭30min。常用的封闭液包括:与二抗同一来源的血清、BSA或者是羊血清。从封闭开始所有的步骤,一定要注意样品的保湿,避免样品的干燥,否则极易产生较高的背景。醛类固定的样品,在用一抗孵育前用含0.3M甘氨酸的封闭液进行封闭。BMP2免疫抗体免疫荧光技术在免疫学研究中发挥重要作用,帮助揭示细胞和分子的功能和相互关系。

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免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。在此基础上又分为两种方法:直接法和间接法。直接法:将标记的特异性荧光抗体直接加到抗原上,经过一定时间反应,即可结合并显色。间接法:先用抗原的抗体(一抗)与抗原反应结合,再用荧光标记的二抗(一抗的抗体)与抗原反应,形成抗体-抗原-抗体复合物。

细胞免疫荧光主要用于蛋白定位研究和细胞内信号转导,细胞免疫荧光技术是利用免疫技术和荧光标记技术相结合,原理就是利用抗原-抗体反应之后,采用荧光标记,标记完成后,显微镜下观察细胞内某种抗原成分的多少,从而做出一个定位研究,也可以为细胞内信号传导提供一个明确的指导,细胞免疫荧光具有敏感性强、特异性高、速度快的特点,是目前比较常用的组织学技术,也是比较精确的。免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合来显示目的蛋白,主要包括蛋白和一抗结合,其次是带有荧光基团的二抗识别并结合一抗,荧光显微镜下即可观察到荧光。免疫荧光技术可以用于研究药物的靶点和作用机制。

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免疫荧光技术的主要特点是:特异性强、敏感性高、速度快。主要缺点是:非特异性染色问题尚未完全解决,结果判定的客观性不足,技术程序也还比较复杂。荧光免疫法按反应体系及定量方法不同,还可进一步分做若干种。与放射免疫法相比,荧光免疫法无放射性污染,并且大多操作简便,便于推广。国外生产的TDM用试剂盒,有相当一部分即属于此类,并且还有TDM荧光偏振免疫分析用的自动分析仪生产。由于一般荧光测定中的本底较高等问题,荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。新发展了几种特殊的荧光免疫测定,与酶免疫测定和放射免疫分析一样,在临床检验中应用。免疫荧光技术是一种利用荧光物质标记抗体来定位抗原的技术。BMP2免疫抗体

在实际工作中,荧光抗原技术应用较少,因此通常将其称为荧光抗体技术或免疫荧光技术。MYeloperoxidase免疫荧光

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