四川培养基灭菌 培养基制备器

培养基配制：配制用水，培养基的大部分是水，所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准，水的电阻应为200万欧姆，一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。培养基：培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基，以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）调pH至7.2-7.4，若pH值超过7.6或远低于6.8，则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌，使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。血清：培养中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高压灭菌，无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体，置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定，一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制，可选用无血清培养基。投资一台高性能制备器可明显降低实验失败率，长期节省时间和成本。四川培养基灭菌 培养基制备器

培养基的制备步骤有哪些：第1，用水：培养基制备用水应使用电阻率不小于30万Ωcm的蒸馏水或与其同质的水，较好不使用离子交换器生产的去离子水。第二，称量。称量时要用独有的角匙，避免交叉污染而影响检验结果；干粉培养基易吸潮，如有条件，尽量在湿度较低的房间称取培养基。第三，复水，复水时不得用铜锅或铁锅，以防有离子混入培养基中，影响微生物的生长；容器的大小需大于复水后培养基总体积的2倍以上，避免在加热溶解过程中，培养基溢出；含有琼脂粉的培养基，在加热溶解之前可以浸泡数分钟；加热培养基时一定要进行搅拌，特别是琼脂类培养基。为避免烧焦和沸腾溢出，对于少量的培养基较好使用沸水浴进行加热。四川培养基灭菌 培养基制备器灭菌失效需验证温度均匀性和保持时间。

培养基制备基本方法：培养基成分的称取，培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱，很好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后，还应进行一次检查。培养基的制备记录，每次制备培养基均应有记录，包括培养基名称，配方及其来源，和各种成份的牌号。很终pH值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。

在制备培养基的过程中，首先要使用一些玻璃器皿，如试管、三角瓶、培养皿、烧杯和吸管等。这些器皿在使用前都要根据不同的情况，经过一定的处理，洗刷干净。有的还要进行包装，经过灭菌等准备就绪后，才能使用。新购的玻璃器皿：除去包装沾染的污垢后，先用热肥皂水刷洗，流水冲净，再浸泡于１～２％的工业盐酸中数小时，使游离的碱性物质除去，再以流水冲净。对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上将水空干，即可使用。液体溢出报警需检查容器装载量是否超标。

培养基中血清的质量标准：血清质量高低取决于两方面因素：一是取材对象，二是取材过程。用于取材的动物应健康无病并且在指定的出生天数之内，取材过程应严格按照操作规程执行，制备出的血清要经过严格的质量鉴定。《用动物细胞体外培养生产生物制品规程》中的要求：牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或国家。并应具备适当的监测系统。有些国家还要求牛血清来自未用过反刍动物蛋白饲料的牛群。证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的抑制物。血清要通过滤膜过滤除菌，保证无菌。无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染，有些国家要求无细菌噬菌体污染。对细胞有良好的支持繁殖作用。真空抽滤不畅应清洁滤膜及检查气密性。四川培养基灭菌 培养基制备器

培养基制备器勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊.四川培养基灭菌 培养基制备器

固体培养基的制作步骤：1、首先我们要准备好一个装有1000ml的烧杯，然后在准备好的杯中在放入500ml的蒸馏水，在将牛肉膏和蛋白胨、氯化钠这些都溶解在水中。2、其次我们在调节PH值，调节时需要百分之10的氢氧化钠溶液，将PH值调到7.2，在此也要定容到1000ml，较后在将这些液体都分别放入10个锥形瓶内，每一瓶都装100ml。3、然后我们再把剪碎的琼脂放进五个锥形瓶里，在给每个锥形瓶中放入2.4克，然后在把这十个锥形瓶瓶口都弄上棉花塞，瓶子也要弄上报纸。4、较后我们就可以将刚才所包扎好的一些锥形瓶放入灭菌锅里，灭菌时一定要记得灭菌十分钟，十分钟到了之后，在将锥形瓶拿出来，冷却之后就成了固体培养基了。注意事项：倒入时一定要注意容易。灭菌时间十分钟，要看好时间。注意事项：倒入时一定要注意容易。灭菌时间十分钟，要看好时间。四川培养基灭菌 培养基制备器