在制备培养基时,通常要考虑以下因素:1.缓冲能力碳算盐缓冲系统由于毒性小、成本低、对培养物有营养作用,因此比其他缓冲系统用得多。在pH值条件下的缓冲能力差。2.渗透压多数培养细胞对渗透压有很宽的耐受范围,一般常用冰点降低或蒸汽压升高测定。如果自己配培养基,可通过测定渗透压防止3.粘度培养基的粘度主要受血清含量的影响,在多数情况下,对细胞生长没有什么影响。在搅拌条件下,用羧甲基纤维素增加培养基的粘度,可减轻细胞损害。这对在低血清浓度或无血清下条件下培养细胞显得尤为重要。培养基通常采用高压蒸汽灭菌。进口培养基制备器供应商
加棉塞:分装完毕后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气,避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作,不要用脱脂棉,以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。制作棉塞时,要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度,揪取手掌心大小一块,铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中,用右手食指插入棉花中部,同时左手食指与姆指稍稍紧握,就会形成1个长棒形的棉塞。棉塞作成后,应迅速塞入管口或瓶口中,棉塞应紧贴内壁不留缝隙,以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松,塞好后,,以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内,上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札,准备灭菌。进口培养基制备器供应商低渗溶液则使细胞吸水膨胀易破裂,因此,配制培养基时要掌握营养物质的浓度。
牛肉膏蛋白胨液体培养基(又称营养肉汤,用于培养细菌):成分:牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g,蒸馏水(或去离子水)1000mL,pH7.4士0.2。制法:将各成分溶解于水中,于20~25℃条件下以1mol/LNaOH溶液用pH计校正pH7.4,分装三角瓶(装量以三角瓶容积的1/2~2/3为宜),或试管(分装量以试管高度的1/4左右为宜),0.1MPa灭菌15~20min后备用。化学分类:天然培养基指一类利用动、植物或微生物体包括其提取物制成的培养基。如牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基等。组合培养基又称为合成培养基或综合培养基,是一类按微生物的营养要求精确设计后用多种高纯化学试剂配制成的培养基。如葡萄糖铵盐培养基、淀粉硝酸盐培养基等。半组合培养基指一类主要以化学试剂配制,同时还加有某种或某些天然成分的培养基。例如,马铃薯蔗糖培养基。
固体斜面培养基配制:培养基各成份的混合和溶化:培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅,以防有微量铜或铁混入培养基中,使细菌不易生长。较好使用不锈钢莴加热溶化,可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动、以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用,应重新制备。待大部分固体成分溶化后,再用较小火力使所有成分完全溶化,迄至煮沸。如为琼脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中,因蒸发而丢失的水分,较后必须加以补足。培养基pH的初步调正:因培养基在加热消毒过程中、pH会有所变化,培养基各成分完全溶解后,应进行PH的初步调正。制备培养基的操作要点:成分基本上溶于水,没有明显的固形物,。
实验室在制作培养基时候的经验总结:1、培养基成份称量:培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱,较好一次完成,不要中断。可将配方置于傍侧,每称完一种成分即在配方上做出记号,并将所需称取的药品一次取齐,置于左侧,每种称取完毕后,即移放于右侧。完全称取完毕后,还应进行一次检查。2、培养基成份的混合与溶化:培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅,以防有微量铜或铁混入培养基中,使细菌不易生长。较好使用不锈钢加热溶化,可放入大烧杯或大烧瓶中置于高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。对一些需严格灭菌的培养基(如组织培养基),较长时间的贮存,必须放在3~6℃的冰箱内。进口培养基制备器供应商
紫外线作用于核酸蛋白促使其变性,同时空气受紫外线照射后产生微量臭氧,从而起共同杀菌作用。进口培养基制备器供应商
培养基的分装:培养基的分装,应按使用的目的和要求,分装于试管、烧瓶等适当容器内。分装量不得超过容器装盛量的2/3。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵,其外还须用防水纸包扎(现试管一般多有用螺旋盖者)。分装时好好能使用半自动或电动的定量分装器。分装琼脂斜面培养基时,分装量应以能形成2/3底层和1/3斜面的量为洽当。分装容器应预先清洗干净并经干烤消毒,以利于培养基的彻底灭菌。每批培养基应另外分装20ml培养基于一小玻璃瓶中,随该批培养基同时灭菌,以为测定该批培养基好终pH之用。进口培养基制备器供应商