四川培养基灭菌 培养基制备器

液体培养基：为确定液体培养基的生长率，应接种适当的培养物。下面介绍的是用定量、半定量和定性方法评估生长率和选择性的方法。所推荐的这些方法都是通过将液体培养基以倾注或划线方式接种到琼脂平板上培养后，计数或计算液体培养基分数而得出其生长数量的。对于液体培养基定性测试方法，则通过肉眼观察来实现。目标菌和非目标菌的定量稀释法步骤如下：选择液体培养基10mL/管待检。接种目标菌：将少量测试菌株培养物(每管10CFU~100CFU)接种测试肉汤和标准肉汤，混匀。接种非目标菌：将大量测试菌株培养物(每管大于1000CFU)接种测试肉汤和标准肉汤，混匀。培养基是生物制品领域中常用的物质，在细菌和细胞培养中十分必要。四川培养基灭菌 培养基制备器

微生物检验培养基制备的要点：培养基摆斜面，灭菌完成后，将试管中的中海琼脂培养基放在木棒或玻璃棒上，同时它很热，并且有适当的坡度。冷却后使琼脂凝固并变成斜面。斜面长度不超过试管的二分之一。微生物培养基质检，检验培养基灭菌后，发现有破损，浸水，颜色异常，棉塞被培养基污染。所有这些都必须丢弃，不能重复使用，并确定其很终pH值。无菌检查和效果检查也是必需的。无菌检查是取1~2瓶无菌培养基，37℃孵育一两天，确认无细菌生长；效果检查是将标准菌株接种到相关培养基上进行细菌检查。动物的生长、形态和生化条件与已知条件一致。两个条件都合格，准备好的培养基就可以使用了。四川培养基灭菌 培养基制备器要根据不同微生物的营养需求选择适宜的营养物质，配制针对性强的培养基。

在制备培养基时，通常要考虑以下因素：(1)pH值多数细胞系在pH=7.4下生长得很好。尽管各细胞株之间细胞生长*pH值变化很小，但一些正常的成纤维细胞系以pH=7.4～7.7，转化细胞以pH=7.0～7.4更合适。据报道，上皮细胞以pH=5.5合适。为确定*佳pH值，做一个简单的生长实验或特殊功能分析酚红常用作指示剂，pH=7.4呈红色，pH=7.0变橙色，pH=6.5变黄色，而pH=7.6呈红色中略带蓝色，pH=7.8呈紫色。由于对颜色的观察有很大的主观性，因而必须用无菌平衡盐溶液和同样浓度的酚红配一套标准样，放在与制备培养基相同的瓶子中。(2)缓冲能力碳算盐缓冲系统由于毒性小、成本低、对培养物有营养作用，因此比其他缓冲系统用得多。在pH值条件下的缓冲能力差。(3)渗透压多数培养细胞对渗透压有很宽的耐受范围，一般常用冰点降低或蒸汽压升高测定。如果自己配培养基，可通过测定渗透压防止称量和稀释等造成的误差。

微生物培养基制备：溶解灭菌后，盘子上无不溶性结晶紫、无紫色斑；与未溶解和消毒的盘子相比，盘子上有结晶紫和紫色斑点。因此正确的步骤顺序是在高压灭菌前需要进行培养基煮沸溶解。先煮沸溶解后冷却至二十五度，确定pH值；对需要高压灭菌的介质取平均值，高压灭菌后冷却至二十五度，这两种状况测量培养基pH值，固体培养基至少检测两个点，取它们的平均值。控制培养基在容器中不要超过百分之八十，避免填充过多。注意控制高压灭菌时间过长（115-116度）二十分钟即可，温度不超过121度，而且灭菌后的培养基在高温环境中不要长时间存放。分装容器应预先清洗干净并经干烤消毒，以利于培养基的彻底灭菌。

培养基制备器：培养基的种类繁多，但制备的方法大同小异，一般可分为6个步骤：用水、称量、溶解复水、灭菌、pH测定、保存。1、必须选用专门纯净水或者经消毒过后的无菌水。2、培养基进行复水的容器不得用铜锅或铁锅，放置离子混入培养基中，影响微生物的生长。3、容器的体积须大于复水后培养基总体积的2倍，预防出现溢出情况。4、在对培养基进行加热时，若培养基内含有琼脂粉成分，则需要将其充分浸泡一段时间。加热的过程中不断进行搅拌防止出现培养基结底炭化从而造成成分损害。部分培养基则需要使用沸水进行加热，预防发生局部烧焦及沸腾溢出。5、琼脂类培养基进行再融化时应使用沸水浴或流动蒸汽进行加热，较多只能加热两次，第二次再融化后仍未用完的培养基应弃去。6、而当对培养基实施灭菌时，需严格按照说明规范操作。但是也不能盲目按照说明的时间进行，需结合实际情况，合理调节灭菌时间，防止出现培养基灭菌过度而造成的成分变性。控制培养基的条件，控制培养基的pH 配制培养基必须根据微生物的特点调节pH。四川培养基灭菌 培养基制备器

培养基各成份的混合和溶化：培养基所用化学药品均应是化学纯的。四川培养基灭菌 培养基制备器

培养基的分装：培养基的分装，应按使用的目的和要求，分装于试管、烧瓶等适当容器内。分装量不得超容器装盛量的2/3。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵，其外还须用防水纸包扎（现试管一般多有用螺旋盖者）。分装时好好能使用半自动或电动的定量分装器。分装琼脂斜面培养基时，分装量应以能形成2/3底层和1/3斜面的量为洽当。分装容器应预先清洗干净并经干烤消毒，以利于培养基的彻底灭菌。每批培养基应另外分装20ml培养基于一小玻璃瓶中，随该批培养基同时灭菌，以为测定该批培养基好终pH之用。四川培养基灭菌 培养基制备器

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