简单制作培养基,需要完成以下几个主要步骤:需要对其进行消毒处理,普通介质使用121℃高压蒸汽灭菌15分钟。本发明适用于各种介质的制备,如无特殊要求,可用于灭菌。一些热成分,如碳水化合物,应该单独制备20%或更多的浓缩液,过滤或间断杀菌,然后通过无菌操作技术加入到培养液中。在低温下,明胶培养基也能杀菌。血、体液及素应经无菌处理后,加至约50℃冷却培养基中。需要对培养基的质量进行检测。每次处理完培养基,都要仔细检查,如破损、浸渍、颜色异常、棉塞污染等,要进行筛选和弃置,才能确定pH值。培养基培养一晚,若有细菌生长,培养基将被丢弃。常规菌株接种1×2管或瓶培养基,24h培养,对生长不良或无菌的菌株进行培养,追踪其产生原因,并反复接种。如不发生变化,应丢弃培养基,禁止使用。选择性培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。辽宁全自动培养基制备器
倒平板:灭菌溶化的培养基冷却到50℃左右后,倒入无菌干燥的培养皿中。培养基的温度不能过高,否则容易在培养皿的内盖上形成太多的冷凝水;温度太低,培养基又容易凝固成块,无法制成平板。倒平板时,应在靠近酒精灯火焰进行,以免外界的杂菌落入平板内,左手拿培养皿,右手拿三角瓶的底部,用左手的小指和手掌部位把三角瓶的棉塞拔下,灼烧瓶口,用大拇指和食指把培养皿盖打开一条缝,至瓶口刚好伸入,倒入培养基,以铺满底为限,不超过培养皿高度的三分之一,迅速盖好盖,放在桌面上,轻轻地转动培养皿,使培养基分布均匀,冷凝后即可。辽宁全自动培养基制备器培养基长时间的高温灭菌会使某些不耐热的物质破坏,如使糖类物质形成氨基糖、焦糖。
培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源(生长因子)等。(1)碳源:能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO2、NaHCO3等无机碳源;糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。(2)氮源:能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO3-、NH4+(无机氮源)蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨(有机氮源)等。只有固氮微生物才能利用N2。培养基还要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如,培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素,培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性,培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性,培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件。
培养基配置原则:在配制用于观察和定量测定微生物生长状况的合成培养基时,常需在培养基中加入少量螯合剂,避免培养基中产生沉淀,常用的螯合剂为乙二胺四乙酸。还可以将含钙、镁、铁等离子的成分与磷酸盐、碳酸盐分别进行灭菌,然后再混合,避免形成沉淀;高压蒸汽灭菌后,培养基pH会发生改变(一般使pH降低),可根据所培养微生物的要求,在培养基灭菌前后加以调整。在配制培养基过程中,泡沫的存在对灭菌处理极不利,因为泡沫中的空气形成隔热层,使泡沫中微生物难以被杀死。因而有时需要在培养基中加入消泡沫剂以减少泡沫的产生,或适当提高灭菌温度。要根据不同微生物的营养需求选择适宜的营养物质,配制针对性强的培养基。
湿热灭菌:湿热灭菌在高压锅或培养基制备器中进行,高压灭菌一般采用121℃±3℃灭菌15min,具体培养基按食品微生物学检验标准中的规定进行灭菌。培养基体积不应超过1000mL,否则灭菌时可能会造成过度加热。所有的操作应按照标准或使用说明的规定进行。灭菌效果的控制是关键问题。加热后采用适当的方式冷却,以防加热过度。这对于大容量和敏感培养基十分重要,例如含有煌绿的培养基。过滤除菌:过滤除菌可在真空或加压的条件下进行。使用孔径为0.2μm的无菌设备和滤膜。消毒过滤设备的各个部分或使用预先消毒的设备。一些滤膜上附着有蛋白质或其他物质(如物品),为了达到有效过滤,应事先将滤膜用无菌水润湿。全自动培养基制备分装系统:一体化控制;主机和选配件(附加剂泵)可通过Mediafill触摸屏一起控制。辽宁全自动培养基制备器
培养基在加热消毒过程中、pH会有所变化,培养基各成分完全溶解后,应进行PH的初步调正。辽宁全自动培养基制备器
培养基的性能测试:1.外观控制:制备好的培养基应有相应的颜色,一般的培养基应澄清、无浑浊、无沉淀。使用前应检查培养基的颜色是否发生变化,是否蒸发/脱水。2.污染控制:从每批制备好的培养基中选取部分进行污染测试(无菌试验),确定无微生物生长方可使用。3.性能测试:(1)测试菌株选择:测试菌株是具有其表示种的稳定特性并能有效证明实验室特定培养基较佳性能的一套菌株。(3)半定量测试方法(改进的划线法接种法)。(4)定性测试方法(平板接种观察法)。用接种环取测试菌培养物,在测试培养基表面划平行直线。辽宁全自动培养基制备器
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