培养基的配制:分装:一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。三角瓶:若作静置培养,则100ml培养基/250ml的三角瓶,很多不能超过150ml培养基/250ml的三角瓶,否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞,造成染菌;若作摇瓶培养,则15~20ml培养基/250ml的三角瓶,保证通气良好。试管分装:液体培养基一般装4~5ml,约试管的1/4高度;固体斜面培养基一般装3~4ml,约试管的1/5高度。包扎:分装好后,塞上棉塞,在用牛皮纸将棉塞包裹好,防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。灭菌:按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高,营养成分会被破坏,培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。摆斜面:灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放,使其凝固成为一个斜面,约占试管长度的1/2。贮存:培养基在30℃下放置,无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。培养基,是指供给微生物、植物或动物生长繁殖的,由不同营养物质组合配制而成的营养基质。宁夏琼脂分装机
灭菌:分装好的培养基应立即进行灭菌。灭菌的方法种类如下:1.高压蒸汽灭菌法:大多数热培养基都可用此法,小量分装时,用121℃、15min;灭菌量大时,用121℃、30min灭菌;含糖类的培养基只能113℃~115℃、15min灭菌,避免糖类遭破坏。2.煮沸灭菌:对含有不耐高温物质的培养基,可使用此方法。3.过滤除菌:以过滤的方法除菌,用无菌操作技术,定量加入培养基。血液、物品可用无菌操作技术抽取,加入冷却到50℃左右的培养基中。培养基含有不耐热的物质时,可用此法。试管自动分装机供应商自动培养基制备分装器是一种用于农学领域的分析仪器:可制备从1升到10升的培养基。
天然培养基中血清主要作用:对培养中的细胞起到某些保护作用:有一些细胞,如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。这种作用是偶然发现的,则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被较广用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保护细胞免受机械损伤,特别是在悬浮培养搅拌时,粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子,他们在代谢中起重要作用,如SeO3、硒等。
配制好的培养基保存:灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度,避免长时间保存在灭菌锅内,造成过度灭菌,影响培养基的营养成分或选择性效果。所配制的培养基的量,应该是在较长保存期限内正好使用完。含染料的培养基应闭光保存;倒好的琼脂平板如果配制的当天未使用完,应于冷藏保存,如果保存时间超过2天,应将其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉汤类培养基如果保存时间超过2个星期,应将其放在带有螺旋盖的试管或其它密闭的试管或容器中防止蒸发。培养基的分装:培养基的分装,应按使用的目的和要求,分装于试管、烧瓶等适当容器内。
简单制作培养基,需要完成以下几个主要步骤:需要选择培养基配方,同一种培养基,其表达方式往往存在着差异。所以,除了应当严格按照标准方法的规定编制之外,我们一般应尽可能收集有关数据,加以比较和核对,然后根据自己的目的选择和记录数据来源。需记录培养基的制备,培养基的制备记录包括培养基的名称、配方及其来源、pH值、灭菌温度、时间、配制日期、制备人等,并且要复印记录和保存原始记录备查。对副本的记录应该和培养基一起保存,以防出现混乱。需称重培养基的成分,培养基成分要准确称量,并注意防止混淆。每一种成分称量完毕后,都要在分装的一面打上记号,然后将分装的药物一起放在左边。每一个成分称量完之后,都会向右移动。全部称量完毕,应再次检查。培养基根据使用范围可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基、培养基等。试管自动分装机供应商
液体培养基具有进行通气培养、振荡培养的优点。宁夏琼脂分装机
液体培养基:为确定液体培养基的生长率,应接种适当的培养物。下面介绍的是用定量、半定量和定性方法评估生长率和选择性的方法。所推荐的这些方法都是通过将液体培养基以倾注或划线方式接种到琼脂平板上培养后,计数或计算液体培养基分数而得出其生长数量的。对于液体培养基定性测试方法,则通过肉眼观察来实现。目标菌和非目标菌的定量稀释法步骤如下:选择液体培养基10mL/管待检。接种目标菌:将少量测试菌株培养物(每管10CFU~100CFU)接种测试肉汤和标准肉汤,混匀。接种非目标菌:将大量测试菌株培养物(每管大于1000CFU)接种测试肉汤和标准肉汤,混匀。宁夏琼脂分装机
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