如果把一个细胞比作一个城市,那么DNA就像是一个管理人员,它坐在细胞核内,监视着“细胞城”的一举一动,像哪里细胞膜破了需要修补,什么时候需要合成蛋白质,显而易见,光靠我们DNA管理人员一个人自然忙不过来啦,于是我们的DNA管理人员决定给自己找一些“打工仔”,它们就是RNA,但是近年来越来越多的研究发现,这些RNA似乎远远不止一个普通默默无闻的“公务员”那样简单,它们在基因表达中发挥着不亚于DNA的巨大的作用,如2006年诺贝尔奖生理/医学奖就颁发给了RNA干扰的两位发现者。RNA干扰现象的发现为遗传研究提供了一种强大的研究手段,这也说明这些对RNA的研究有着巨大的前景.而作为南大较好科研接班人的我们自然也不能甘于人后,于是我们决定从酵母RNA的提取开始做起。拭子RNA提取试剂的选择?离心柱的硅胶膜RNA吸附性能好、裂解液细胞裂解能力强。金华唐山RNA提取试剂
提取RNA的详细步骤:首先,将研钵晾干够,倒入1/3体积的液氮,加入0.2g均质的植物材料,充分研磨后转入一个含有300微升GMT的1.5ml的离心管中,摇匀。然后,加入30微升2mol/lNaAc进行摇匀,加入300微升酸酚摇匀,加入100微升的氯仿摇匀。然后,在四摄氏度12000r/min下离心二十分钟,吸取上清液的3/4,加入等体积的异丙醇,于冰上放置十五分钟。然后,在四摄氏度12000r/min下离心十分钟,将沉淀悬浮于含100微升的4mol/lLiCl小试管中,于-20摄氏度下放置过夜。然后,在4摄氏度13000r/min下离心10-15min,将沉淀溶于0.4mlDEPC处理水中,加入1/2体积氯仿和1/2体积酸酚,摇匀,进行抽提,在4摄氏度13000r/min下离心五分钟。将上清液中加入等体积的氯仿摇匀,进行抽提,在四摄氏度13000r/min下离心五分钟,上清液中加入1/10体积3mol/lNaAc和两倍体积的午睡乙醇与-20摄氏度放置一小时。金华唐山RNA提取试剂能迅速破碎细胞,压制细胞释放出的核酸酶。
酵母总RNA快速提取试剂盒(离心柱型):一、原理简介。改进的异硫氰酸胍/酚一步法裂解细胞和灭活RNA酶,然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,较后低盐的RNasefreewater将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。二、试剂盒特点:1、离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界有名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。2、结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好,纯度高和离心柱方便快捷的优点,不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程,RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。3、独有的RL裂解液配方,可以有效的消除基因组污染。
血浆/血清中miRNA提取试剂盒:是专门针对血清、血浆样本中miRNA提取而开发的,利用吸附柱法从血清、血浆样品中简单快捷提取高纯度高质量的miRNA。该试剂盒中的裂解液miRBP1及柱结合液miRBP2具有高效裂解及提取效果。试剂盒中的吸附柱采用特殊的硅基质膜材料,对RNA尤其是smallRNA(<200nt)具有结合能力,与常用的抗凝剂(包括肝素、EDTA、柠檬酸钠、草酸钠)兼容,得到的miRNA可直接用于RT-PCR和Northern杂交等后续分子生物学实验操作。普通植物总RNA提取试剂盒:采用进口硅基质膜制作的总RNA吸附柱,可以从普通植物的根、茎、叶中快速提取总RNA,30~40分钟内即可完成提取过程,提取的总RNA纯度高,没有DNA和蛋白质的污染,适用于RT-PCR、qRT-PCR、芯片分析、Northernblot杂交等实验。总RNA吸附柱保证RNA提取速度快,提取效率高。高效去除植物组织中的色素、酚类等杂质,提取RNA的纯度高,产量大RNA存在于水相中。水相转移后,RNA通过异丙醇沉淀回收。
RNA提取试剂盒原理:该EpiQuik™总RNA提取试剂盒提供了一种快速,简单,经济有效的方法,可从全血,哺乳动物细胞,细菌细胞和菌类细胞中分离总RNA。优化的洗涤剂和离液盐用于裂解细胞并灭活核糖核酸酶。专门的高盐缓冲系统允许RNA物质基团结合到旋转柱的玻璃纤维基质上,同时使污染物通过柱被有效地洗去。纯的RNA用RE缓冲液洗脱,不用酚提取或醇沉淀。RNA提取试剂盒特点:1、快速程序在25-40分钟内提供高质量的总RNA。2、即用型RNA,可在绝大多数下游应用,例如RT-PCR,cDNA合成,NorthernBlotting,Differentialdisplay,PrimerExtension,mRNAselection。3、适用样品:全血,哺乳动物细胞,细菌细胞和菌类细胞(样品起始量:300μl全血,10^7个哺乳动物细胞,10^9个细菌细胞和10^8个菌类细胞。总共可以使用该试剂盒进行50次标准提取。总RNA的产量可达30μg。产量可能因样品类型而异。)植物RNA提取试剂产品特点:是富含多酚或淀粉的植物组织中,提取高纯度的总RNA。金华唐山RNA提取试剂
RNA提取试剂注意事项:硫氰酸胍/苯酚法的一种即用的从细胞和组织中提取总RNA的试剂。金华唐山RNA提取试剂
RNA的提取:众所周知,Trizol是一种RNA提取试剂,内含异硫氰酸胍和酚等物质,能迅速破碎细胞和溶解细胞中的其他成分,压制细胞释放出核酸酶,维持细胞中RNA的稳定性,我们可以在反应物中加入Trizol后摇匀,在加入氯仿离心,这样的话我们的RNA就进入了水相中,再用异丙醇沉淀水相中的RNA,即可达到提取总RNA的目的了。首先我们需要称取一定量的预处理好的废酵母配10%左右的酵母溶液,在一定温度下,加入一定浓度的氯化钠,之后加入NaOH溶液调节反应的pH,搅拌抽提一定时间后,离心分离上清液,调节pH至等电点,经酒精沉淀获得核糖核酸,用水定容至100mL取1m适当稀释,调pH7.0,这样的话RNA就出现了,分别测定吸光值A260和A280并计算A260/A280,就可以测定RNA的提取率了。当然啦,我们还可以进行深入研究,如测定Nacl的浓度,PH的大小,以及抽提时间对RNA提取率的影响啦。金华唐山RNA提取试剂