具体实施方式实施例1止血材料的制备1、选择能与鼠尾胶原蛋白联合发挥作用的聚乙烯醇、壳聚糖作为辅料。各个材料重量配比为鼠尾胶原蛋白聚乙烯醇壳聚糖为0.2%0.2%。余量为水。2、将混合材料用无菌水溶解后浇入培养小板,-40°C预冻池,再转入_80°C超低温冰箱急冻4h,再转入真空冷冻干燥机中将复合材料在-4°C下冷冻干燥10h,即可以得到复合型冻干止血材料。Co60辐射灭菌,干燥保存。冻干的材料可直接用于各种伤口的止血。实施例2止血材料的制备1、选择能与鼠尾胶原蛋白联合发挥作用的聚乙烯醇、壳聚糖作为辅料。各个材料重量配比为鼠尾胶原蛋白聚乙烯醇壳聚糖为5%2%1%,余量为水。2、将混合材料用无菌水溶解后浇入培养板,-20°C预冻,再转入_80°C超低温冰箱急冻8h,再转入真空冷冻干燥机中将复合材料在-4°C下冷冻干燥30h,即可以得到复合型冻干止血材料。Co60辐射灭菌,干燥保存。建立利用自制的鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法。贵阳正规鼠尾胶原厂家供应
利用鼠尾Ⅰ型胶原构建与人类自体骨组织化学成分和分子结构相近的仿生骨材料。方法通过醋酸酸解提取鼠尾Ⅰ型胶原蛋白,并重构成胶原纤维。然后,将重构后的胶原纤维放置在矿化液中模仿骨生物矿化2~6d,通过透射电子显微镜和电子衍射观察骨生物矿化。结果酸解提取的鼠尾Ⅰ型胶原蛋白能够重构成胶原纤维,并且具有特征性的D-Band结构。透射电子显微镜和电子衍射显示:矿化2d后,羟基磷灰石钙前体渗入胶原纤维,胶原纤维部分矿化;矿化6d后,胶原纤维内部完全矿化,形成Ⅰ型胶原蛋白/羟基磷灰石钙的仿生骨材料。结论利用酸解法提取的鼠尾Ⅰ型胶原蛋白可以重构成胶原纤维,经矿化可形成与人类自体骨组织化学成分和分子结构一致的仿生骨材料。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便,成本低廉。苏州鼠尾胶原单价鼠尾胶原醋酸溶解:在无菌条件下转移上层的胶原溶液。
鼠尾胶原在心肌细胞氧化损伤中的保护作用:原蛋白具有抗氧化作用,但既往在实验室主要将鼠尾胶原用于促进细胞贴壁和支架构建,对于其抗氧化作用目前尚无相关研究。目的:探讨鼠尾胶原对过氧化氢导致离体心肌细胞氧化损伤的保护作用。方法:将原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机接种到铺有鼠尾胶原的培养皿(实验组)和普通培养皿(对照组)中,并且均用0,10,100μmol/LH2O2诱导。24h后,以电子显微镜观察各组乳鼠心肌细胞的形态,应用MTT比色法检测心肌细胞存活率,TUNEL法检测心肌细胞凋亡形态,流式细胞技术检测心肌细胞凋亡率,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法检测丙二醛水平,Western-Blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达。
一种生物医用鼠尾胶原蛋白的提取方法:1.用0.03〜0.06mol/L的柠檬酸溶液溶解沉淀物,成透明澄清黏稠溶液;在冰水浴中,调节pH=6.5,用的3〜6mol/L的NaCl溶液缓慢加入上清液中,不断搅拌至溶液中白色的絮状物不再析出,4°C沉淀10小时,去除上清液,去除上清液,絮状溶液高速冷冻离心处理,收集沉淀;2.用0.03〜0.06mol/L的柠檬酸再次溶液溶解沉淀物,成透明澄清黏稠溶液,冰水浴中,调节PH=6.5;溶液依次通过阳离子交换树脂、阴离子交换树脂进行脱盐处理;(8)将脱盐后的胶原蛋白溶液,-40至-20°C预冻2〜4小时,然后真空冷冻干燥,冻干产品经进一步处理得到含水率在3%以下的胶原蛋白微粉,灭菌、包装,得到成品胶原蛋白粉末。利用鼠尾胶原将小玻片固定于培养瓶内。
鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事项:将培养器皿在室温(25度左右)下放置20分钟待胶凝固后,转移到培养箱内。如果配制中使用的是10PBS,使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。B.含细胞的三维胶原的制备(以配制200ul鼠尾胶原蛋白(5mg/ml)加到(如果反过来把12ul0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入23ul10PBS10培养液,混匀(混匀后pH左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用pH试纸测试)。加入760ul的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放20分钟待胶凝固后,加入适当体积的细胞培养液,转移到培养箱中培养。注意事项:在室温下pH中性时可迅速成胶,在操作过程中要尽量保持低温。碱法提取胶原蛋白常用的处理剂为石灰、氢氧化钠、碳酸钠等。武汉正规鼠尾胶原直销厂家
一种生物医用鼠尾胶原蛋白的提取方法,采用酸法与酶法相结合的工艺。贵阳正规鼠尾胶原厂家供应
鼠尾胶原蛋白的提取方法,采用酸法与酶法相结合的工艺,保持恒低温无菌的环境,利用同样浓度的盐溶液进行两次盐析与离心,简化了提纯步骤。所用酸为低浓度酸溶液,并采用柠檬酸替代醋酸进行提纯。从提取原料到样品生成过程中,进行多次真空冷冻干燥,并经进一步处理获得含水率在3%以下的胶原蛋白微粉;较后由灭菌、无菌包装,成品胶原蛋白粉末的纯度在98%以上。本发明获得的胶原蛋白降低了蛋白的免疫原性,提高了产率和生物相容性,降低了成本,适用于生物医用材料,所得到的胶原蛋白能完整地保留其特有的三股螺旋结构。贵阳正规鼠尾胶原厂家供应