外泌体的提取分离:1、超滤离心。由于外泌体是一个大小约几十纳米的囊状小体,大于一般蛋白质,利用不同截留相对分子质量(MWCO)的超滤膜对样品进行选择性分离,便可获得外泌体。超滤离心法简单高效,且不影响外泌体的生物活性,是提取细胞外泌体的一种新方法。2、磁珠免疫法。外泌体表面有其特异性标记物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合,即可将外泌体吸附并分离出来。磁珠法具有特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整等优点,但是效率低,外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响,不利于下游实验,难以普遍普及。外泌体提取:低速离心去除细胞和凋亡碎片。武汉外泌体提取试剂哪里买
外泌体提取:尺寸排阻色谱。尺寸排阻色谱(Size-exclusionchromatography,SEC)是基于大小而非分子量实现分离大分子。该技术应用填充多孔聚合物微球的柱子,分子根据其直径通过微球,半径小的分子需要更长的时间才能通过色谱柱的孔隙迁移,而大分子则从色谱柱中更早地洗脱。尺寸排阻色谱可以精确分离大小分子。此外,可以将不同的洗脱溶液应用于该方法。与离心方法相比,色谱分离已被证明具有更多优势,因为通过色谱分离的外泌体不受剪切力的影响,这可能会改变囊泡的结构。目前,SEC是一种普遍接受的分离血液和尿液中外泌体的技术。不过,该方法耗时较长,不适合大量样本处理郑州正规外泌体提取试剂报价外泌体的特殊结构和功能,使得它具有潜在的应用价值,可以作为诊断多种疾病的生物指标。
外泌体(exosome),特指直径在40-100nm的盘状囊泡。其主要来源于细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。现已证实可以分泌外泌体的细胞有:肥大细胞、淋巴细胞、树突状细胞、瘤细胞、间充质干细胞等。外泌体在免疫中抗原呈递、瘤的生长与迁移、组织损伤的修复等生理病理上起着重要的作用。同时,不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能,可作为疾病诊断的生物标志物。细胞外囊泡是蛋白质、mRNA、miRNA和脂质运输来完成细胞间通讯通路的重要媒介,根据它们的大小和发生分为三类,包括外泌体、微泡和凋亡小体。其中,外泌体是直径大约为40-100nm的包装囊泡,由多种细胞分泌,内含有特定的蛋白质、脂质、细胞因子或遗传物质。来源于不同的组织的外泌体不光具有其特异性蛋白分子,而且还包含其行使功能的关键分子
外泌体的提取方法学规范、统一定量及鉴定等。关于外泌体的提取有超速离心、试剂盒、超滤法、蔗糖密度梯度离心等,然而各种方法均有其利弊。超速离心法是目前外泌体相关文章中的主流方法,由于离心步骤繁琐,费事费力,而且步骤多导致实验中容易污染,且损耗量大,使得较终回收的外泌体不稳定。而且对于抽提细胞上清来说,更是极为不请便,试想用提取300ml的上清需要6个50ml离心管,无论是过滤还是后续的每一步的离心去沉淀,都具有操作极其不便的缺点,总之非常麻烦。而超滤法存在外泌体会堵塞膜孔,造成浓缩效率低,浓缩管重复利用差,甚至堵塞在膜孔的外泌体还可能会粘连成团,造成损失及较后的数据有误差,对于后续实验也有影响外泌体提取:超离法是较常用的外泌体纯化手段,采用低速离心、高速离心交替进行。
2018版《指导要求》说明外泌体没有限定单一的分离手段,多种手段都可以进行细胞外囊泡的富集。《指导要求》编写者们认为“高回收率,低特异性”的富集手段是指那些富集囊泡的同时会有大量的非囊泡组分被富集,甚至细胞的整个分泌组都会被掺入其中,归入这一类的分离手段主要包括通过改变电荷或通过高聚物作用的沉淀试剂盒、低分子量截流的超滤分离、超长时间和超高离心力的超速离心等。Wako的MagCapture™ExosomeIsolationKitPS(产品编号299-77603(2tests),293-77601(10tests)),使用PS亲和法对外泌体进行提取,损失小且能获得高纯度的外泌体。外泌体提取:密度梯度离心。广州外泌体提取试剂服务电话
现已证实可以分泌外泌体的细胞有:肥大细胞、淋巴细胞、树突状细胞、一些病症细胞、间充质干细胞等。武汉外泌体提取试剂哪里买
外泌体与免疫系统:不同的细胞来源的外泌体,包括免疫细胞(B细胞和树突状细胞)、病细胞、上皮细胞和间充质细胞,释放出带有载体的外泌体,可影响先天免疫系统和适应性免疫系统中受体细胞的增殖和各自的活性。CD4+和CD8+T细胞可直接或间接地受到外泌体的影响,刺激或压制其增殖和功能。外泌体与代谢性和心血管疾病:外泌体可以通过携带miRNA或代谢物分子在代谢性疾病和心血管疾病的发生的发展过程中起作用。体外培养心血管疾病的细胞收集的外泌体与疾病相关的代谢适应有关;体外培养的间充质干细胞和胚胎干细胞的外泌体具有保护心血管的作用。武汉外泌体提取试剂哪里买