猪病诊断PCR检测方法

PCR(PolymeraseChainReaction)是一种复制核酸片段并提高DNA产量的技术，即所谓的聚合酶链式反应，这种技术可以在数小时内大量复制特定的基因片段。由于其高敏感性和高特异性的特点，PCR技术被应用在宠物疾病分子的诊断上，将从疑似患病宠物（血液、眼鼻分泌物、粪便，尿液或腹水）中采样的极微量病原(细菌、病毒或寄生虫)特定核酸片段样本，透过PCR的方式大量被复制，再以核酸电泳的方式判读结果，从而获得早期、快速、稳定和准确的诊断结果.无论是猪瘟、蓝耳、牛鼻支、牛腹泻等畜禽类传染性疾病都可利用巧亦捷核酸一体机进行准确诊断。猪病诊断PCR检测方法

目前，市面上的宠物用分子检测平台普遍存在操作复杂，单价偏高，灵敏度不佳等问题，巧亦捷依托于自主研发的薄膜微流控技术，经多年沉淀，研发出全自动快速核酸检测一体机及多种配套检测试剂，仪器自动进行核酸提取和PCR扩增，让使用者将样本加入薄膜囊袋中就可上机进行核酸检测，且支持多重联检功能，一次可检测多种病原体。多重宠物检测试剂除了可解决操作的复杂性问题，也由于采用常规的多重PCR策略，可大幅降低检测试剂的费用。江苏动物检疫PCR扩增常用的qPCR方法有荧光染料法（SYBR Green I）和探针法（TaqMan）。

说PCR仪(尤其是实时荧光PCR仪)是动物诊断工具的中流砥柱毫不为过。然而，即时、快速和准确的检测是广大兽医站和养殖场对检测仪器更高的诉求。面对传染性疾病，用户对便携、易操作、准确性高、成本相对低廉的检测设备需求更为迫切。事实上，以微流控芯片作为耗材，搭配后端定量PCR的检测在临床检测领域已有成型产品——即巧亦捷全自动薄膜微流控快速核酸检测一体机。它实现了从核酸提取、PCR扩增、荧光检测全流程自动化芯片内完成，样本进，结果出，检测时间短，全程无需专业技术人员参与，可实现基于病症的多项目联检，特别适合宠物医院、兽医站、养殖场等现场快检应用场景。

PCR技术是从DNA水平对病原进行检测，将病原DNA进行大量的扩增，在通过多种途径对扩增后的产物进行检测，胶体金检测方法虽然快速、便捷的，但是该种方法是从蛋白水平对病原进行检测，故存在一定的交叉反应和动物自身抗体干扰，导致临床应用的过程中出现假阳性和假阴性的结果，巧亦捷核酸检测一体机采用的PCR技术从根本上避免了检测呈现假阳性或弱阳性的结果，极大提高了检测的灵敏性和特异性。此外，利用PCR引物的高度特异性，可以排除其他所有非致病原体的干扰，实现精确的诊断，与其他检测方法相比具有不可比拟的优势。在准确的前提下，高效显得尤为重要。

巧亦捷核酸一体机采用的探针法荧光PCR与常规PCR的不同之处在于：在上、下游引物外还加入了具有序列特异性的探针（探针本身具有荧光标记），该探针根据需要扩增的靶序列设计因此只能与待检测序列结合，与染料法相比提高了实验的特异性。目前市场上的探针主要种类有：TaqMan、MolecularBeacon、Scorpions、Hybirdization等，其中以TaqMan探针应用宽泛。TaqMan探针的结构：长度与普通PCR引物类似，大约20bp左右。在5’与3’端各标记有一个荧光基团，5’的荧光基团称为报告基团（Report），3’的荧光基团称为淬灭基团（Quencher）。TaqMan探针的性能：在探针结构完整的情况下用特定的波长激发报告基团，由于报告基团与淬灭基团的空间位置很近，因此报告基团能够通过FRET（FluorescenceResonanceEnergyTransfer）将接受的能量转移到淬灭基团，使后者以发射荧光或热量的方式释放能量，而报告基团并不发射特定波长的荧光信号。PCR技术又可以分为定量PCR和常规PCR，定量PCR分为实时荧光定量PCR（RT-PCR）和数字PCR。动物疾病PCR猪病诊断

巧亦捷以薄膜微流控技术为依托，实现分子诊断在临床应用端的场景边界的拓展创新。猪病诊断PCR检测方法

巧亦捷核酸检测一体机的优势在于：1、全流程：以不**灵敏度和特异性为前提，将核酸提取、分子扩增、荧光检测集成在一张生物芯片上，可实现真正意义上的“样本进-结果出”。2、速度快：人工操作时间*为2分钟，从样本进到结果出只需35分钟。3、操作简单：沿用传统的检测方法学，无需复杂的实验室以及苛刻的反应环境，也无需专业的培训，随到随检，目前，巧亦捷采用“设备+试剂“的销售，与传统中心实验室相比，拥有同样的核酸检测结果的准确度，并且体积更小更易携带，检测时间短，更能满足即时检测的需求猪病诊断PCR检测方法