外泌体用于细胞学或动物实验前的无菌处理 已经经过上述方法制备的外泌体在进行细胞或动物实验之前还需进行一步除菌过滤,这个时候考虑到得率,应该采用离心法处理,以减少过滤时的外泌体样品损失。 超滤方法纯化具体操作步骤举例 Amicon® Ultra-15 超滤管 (10 kDa MWCO) 用Steriflip®真空抽滤对样品进行澄清[目录号SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜] 用PBS平衡Amicon® Ultra-15 超滤管(目录号UFC901024,10 kDa MWCO) ,4000g离心 X 10 min。 从超滤管内管及收集管吸走PBS。向超滤管加入15 mL 样品。4000g 离心30 min 浓缩。倒空收集管。加入14 mL PBS 进行缓冲液置换,温柔吸打样品数次。4000g离心 30 min。从浓缩管吸回处理好的样品。(30X 浓缩) 注意 : 所有 Amicon® Ultra 超滤管 (0.5, 2, 4 和 15 mL) 与此操作流程兼容 *上海Millipore超滤浓缩管授权代理商!青浦区Merck超滤浓缩管一级代理
用于搅拌式超滤杯的Ultracel®预切超滤膜片 Ultracel® 再生纤维素膜可以用来对较为稀释的溶液进行脱盐或浓缩。Ultracel® 膜是亲水性的,微观结构紧密,确保对蛋白、核酸等大分子吸附比较低而回收率比较高。 *膜的常规截留分子量分为1, 3, 5, 10, 30及 100 kDa等。 *膜片直径分为25, 44.5, 47, 63.5, 76, 90及150 mm。 对于大体积、高浓度(如蛋白浓度大于 1.0 mg/mL)的样品进行脱盐和浓缩,Biomax®聚苯醚砜(PES)超滤膜是很好的选择。血清、血浆或条件组织培养基等,都是 Biomax®超滤膜适合处理的样品。 *膜的常规截留分子量为5,10,30, 50, 100, 300和500kDa等。 *膜直径分为25,44.5,47,63.5和76mm。崇明区超滤浓缩管联系方式那么超滤浓缩管施工的优势都有哪些呢?
离心方式的超滤方法进行溶液置换也被称为“渗滤”,操作时样品首先被浓缩,继而加入新的溶液,再次浓缩时,原溶液已经被换成选定的溶液。 化学相容性与溶出 样品的化学背景有时很多样而复杂,过滤的过程中很重要的一点是操作过程不应给样品带来新的污染。所以滤膜和装置与样品接触的其它部分都不能与样品中的化学成分发生反应而产生溶出污染。关于默克密理博各种微滤、超滤产品的化学相容性请参考产品使用说明书或垂询技术支持专线 。回收率及其重要性超滤的**终目的常常是很大程度地回收目标溶质,但膜的很多特性会对这一目的产生影响。影响回收的因素包括:• 标称分子量限制(NMWL)/ 核酸截留分子量(NCO)• 截留 • 浓差极化 • 通量
核苷酸截留分子量(NCO) 超滤膜的 NMWL 是用球形蛋白标定的,适合各种蛋白研究,但在核酸 和多糖纯化时则要考虑更多因素。这些分子的棒状的三维结构容易漏 过,相对于球形蛋白需要更致密的膜(截留分子量更小)。所以选择 滤膜是更多考虑的是核苷酸长度而非分子量。 浓差极化 浓差极化实质是溶质累积在膜表面造成的堵塞,产生除了膜本身截留分 子量以外的过滤限制。当溶质浓度较高时,会形成相当于第二层滤膜作 用的胶体层,干扰分子通过滤膜,同时降低流速。pH 值、缓冲液的成分 也会影响目的分子的状态而使浓差极化现象加剧或减轻。超滤浓缩管直销公司。
Amicon® Ultra 4 mL 超滤管 -离心速度快而保持很高的回收率 4 种不同蛋白在不同截留分子量的 Amicon® Ultra 4mL 超滤管中浓缩(3kDa 细胞色素 C, 10kDa 细胞色素 C,30kDa BSA,100kDa IgG), 测定在离心一定时间后的回收率。数据显 示所有样品在离心 15 分钟左右回收率均 >95%。 为了方便初次使用者选择**合适的超 滤管产品,默克密理博生命科学部网 站上提供选择指引,您需要按照提 示进行选择,**终会选出一款产品。 为每次实验选择**合适的, 您也能快速成为超滤高手!超滤浓缩管的好处有很多。上海默克15ml超滤浓缩管订购
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首先,Amicon® Ultra超滤管的蛋白比较低起始浓度为25ug/ml。请确保样本的起始浓度大于这个浓度。其次,如果问题仍然出现,请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因: 1)如果目的样本在滤过液中,那么请排查: a)是否选择了合适截留分子量的超滤管(目的蛋白分子量的1/2或者1/3)? b)使用的离心力是否是在限定范围内?如果使用的是rpm,请换算成相应的g离心力,具体换算方法请垂询。 c)离心机**近是否有校准过? d)是否***尝试这个蛋白?青浦区Merck超滤浓缩管一级代理