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测 注意：所有抗体均使用0.5％NFDM作为封闭剂和Luminata™Forte Western HRP进行测试作为化学发光试剂的底物。 印迹阻止 •SNAPi.d.®2.0系统与比较常用的封闭剂兼容，包括脱脂/低脂干燥牛奶，牛血清白蛋白（BSA）和酪蛋白。许多其他市售阻滞剂也兼容（请参阅表5）。•为了确保比较佳的墨量通过吸墨架，必须完全封闭封闭液溶解且不含所有颗粒物质。在某些情况下，可能有必要降低封闭剂以达到所需的流量。•不建议使用浓度高于0.5％的脱脂/低脂干奶。•封闭剂应在含有0.1％Tween®20的tris或磷酸盐缓冲盐溶液中制备表面活性剂，以降低表面张力并确保封闭剂在印迹架上均匀分布表面。•为确保抗体在孵育步骤中均匀分布，请在封闭液中稀释抗体，包含Tween®20表面活性剂。 如何使上海益启生物WB实验加速器订购方便。崇明区Merck微流控细胞芯片分析仪Merck仪器

盘，请在步骤5之后插入托盘。有关详细信息，请参阅“抗体恢复”部分。 6.在整个表面上涂适量的一抗吸墨纸架的数量（对于MultiBlot为2.5毫升，对于迷你吸墨纸为5毫升，或10 mL用于Midi印迹）。7.在室温下孵育10分钟。解决方案将是吸收到污点固定器中，表面可能会变干。重要提示：请勿在吸尘器清洁后再使用真空吸尘器。孵育10分钟。8.向下压框架并施加真空。等待5-8秒，直到框架完全是空的。9.在连续运行真空的情况下，添加30 mL洗涤缓冲液（MultiBlot为15毫升）。重复洗涤步骤3次以上（总共4次洗涤）。当框架完全为空时，将TURN真空关闭。10.在印迹架的表面上涂适量的二抗（对于多印迹，为2.5 mL，5毫升用于迷你印迹，或10毫升用于Midi印迹）。在室温下孵育10分钟，然后长宁区Merck手持细胞计数器Merck仪器联系电话益启生物公司带您了解微流控细胞芯片分析仪详情。

疫检测对照，茴香霉素处理和PDGF处理的3T3小鼠成纤维细胞裂解液（10-0.63 ug）被转移到Immobilon8-P膜上。印迹被阻止补充有0.5％脱脂奶粉（NFDM）的Tris缓冲盐水含0.1％Tweeno 20表面活性剂（TBST），并用一级抗B-Tubulin进行探测（MAB3408）和次级HRP偶联的山羊蚂蚁（AP1 24P）在上述条件。将印迹暴露于X射线胶片一分钟。维护SNAP i.d.o 2.0系统清理去除协议每次使用时应清洁SNAP i.d.o 2.0系统。清理去除盐碱中的盐或污染物和管道，抽吸真空并通过系统冲洗散去的水。注：请勿对SNAP i.d.9 2.0系统进行高压灭菌。可以拆卸框架，并用中性清洁剂洗涤，然后用蒸馏水彻底冲洗。风干。要拆卸框架，请使用右侧的蓝色夹子调整框架的方

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润湿印迹。，对于大多数应用和大多数抗体而言，0.5％的脱脂/低脂干奶溶液可以提供足够的膜的阻塞。注意：请勿使用浓度高于0. 5％的干奶，因为它可能会导致吸墨纸架堵塞膜。如果使用其他封闭溶液，请参阅表5了解兼容性和推荐浓度。●在洗涤，封闭和抗体缓冲液中始终使用0.1％Tween8 20表面活性剂。这将减少溶液的表面张力，并确保孵育过程中抗体在印迹支架中的均匀分布。●由于SNAP i.d. @ 2.0系统中的免疫检测时间很短，因此建议在开始操作之前应准备一抗和二抗稀释液。●MultiBlot固定器所需的稀释抗体的总体积为2.5 mL，Mini blot固定器为5 mL，10 mL用于Midi印迹固定器。，每次需要洗30次（MultiBlot为15毫升），以确保每次洗完后都能完全清洗印迹孵化步骤。上海益启生物的电阻仪询价公司电话。崇明区Merck微流控细胞芯片分析仪Merck仪器

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关闭真空。同样，溶液将被吸收到印迹架中，并且表面可能看起来干燥。重要提示：孵育10分钟后，再抽真空。11.向下压框架并施加真空。等待5至8秒钟，直到框架完全空了。真空运行连续添加30 mL洗涤缓冲液（对于MultiBlot为15 mL）。重复洗涤步骤3次（共3次）4次洗涤）。12.关闭真空，然后从框架上取下吸墨架。从污点固定器中取出污点，并与适当的检测试剂。如果使用了MultiBlot孔空白，则卸下并清洗。 扩展一级抗体孵育：一小时至过夜1.执行《通用议定书》的步骤1至5。2.加入2.5 mL（对于MultiBlot），5 mL（对于Mini blot）或10 mL（对于Midi blot）1X一抗（浓缩液）通常在标准免疫检测过程中使用）。3.用盖子盖住吸墨纸固定架。如果需要的话，将其从底座崇明区Merck微流控细胞芯片分析仪Merck仪器

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