PCR扩增及电泳 PCR扩增使用Identifiler Plus试剂盒,10 μl扩增体系中含4 μl master mix、2 μl primer set、4 μl模板,扩增程序为,95℃,11分钟;94℃,20 秒,59℃,3分钟,30个循环;60℃,10分钟;4℃保存;电泳在ABI 3500XL仪器中进行;电泳上样体系为,1 μl PCR产物,9 μl甲酰胺,其中已加Liz。 实施例3 以玻璃纤维膜提取土壤尿液DNA 1)DNA提取 刮取含有尿液的表层土壤,烘干,取100-200 mg土壤样品,加入样品管中,然后加入400 ul土壤裂解液和20 ul 蛋白酶k,震荡混匀后,75℃加热裂解15分钟;最大转速离心5分钟,将上清液转移至新的样品管中,加入800 ul结合液,混匀;混合液转移至装有玻璃纤维的离心柱中,在上海益启生物买土壤DNA提取可以退货吗?杨浦区FastDNA SPIN土壤试剂盒土壤DNA提取哪家好
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实施例1 以二氧化硅纳米颗粒提取土壤尿液DNA。 1)DNA提取 刮取含有尿液的表层土壤,烘干,取100-200 mg土壤样品,加入样品管中,然后加入400 ul土壤裂解液和20 ul 蛋白酶k,震荡混匀后,75℃加热裂解15分钟;最大转速离心5分钟,将上清液转移至新的样品管中,加入800 ul结合液,混匀;混合液转移至装有15 ul二氧化硅纳米颗粒的离心管中,混匀后静止15分钟;8000rpm离心1分钟去除上清液;加入500 ul漂洗液,混匀,8000rpm离心1分钟去除上清液;加入500 ul漂洗液,混匀,8000rpm离心1分钟去除上清液;70℃加热3分钟;加入20 ul洗脱液,震荡混匀,70℃加热3分钟;
所述pH缓冲剂为Tris-HCl、Tris-醋酸、NaH2PO4-Na2HPO4、KH2PO4-K2HPO4、醋酸-醋酸钠、柠檬酸-柠檬酸钠,所述pH缓冲剂的pH值为7.0-11,推荐的pH缓冲剂为Tris-HCl,推荐的pH缓冲剂的pH值为7.5-8.5; (b)结合液,其组成成分包括表面活性剂、离液盐、pH缓冲剂; 所述表面活性剂为:聚乙二醇辛基苯基醚、TWEEN 20、TWEEN 40、TWEEN 60、TWEEN 80、NP 40中的一种或两种及以上的混合,所述表面活性剂的质量浓度为1-100g/L; 所述离液盐为异硫氰酸胍、盐酸胍、硫氰酸钾、高氯酸钠、碘化钾、碘化钠中的一种或两种及以上的混合,所述离液盐的浓度为3-5 mol/L; 所述pH缓冲剂为Tris-HCl、Tris-醋酸、NaH2PO4-Na2HPO4、KH2PO4-K2HPO4、醋酸-醋酸钠、柠檬酸-柠檬酸钠,所述pH缓冲剂的pH值为4.5-7.0;实验室用的土壤DNA提取推荐购买什么品牌?
入RAase消化。问题7:A260/A230比值低怎么办?解决思路:·A230是多肽、芳香基团、苯酚和一些碳氢化合物的吸光度,A230高表示样品中存在一些污染物。【1】蛋白去除不干净:增加蛋白沉淀离心的次数。【2】杂质去除不干净:洗脱之前,核酸吸附柱中尽可能不要残留液体,可增加空离心次数和时间。问题8:提取的DNA出现降解怎么办?解决思路:·优化裂解条件,避免过度裂解,降低物理破碎的力度·操作过程中是否有污染DAase,造成DNA降解上海关于土壤DNA提取的哪家靠谱?嘉定区土壤微生物DNA土壤DNA提取订购
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实验的时候,有没有遇到过实验结果不符合预期的情况,提取DNA的纯度过低、浓度达不到预期或者是出现弥散现象。***给大家聊一聊一下其他同学遇到的问题,以及MP技术人员给出的解决方案,希望可以帮到大家,在以后的实验中顺顺利利~问题1:土壤样品含水量过高怎么办?解决思路:· 如果土壤样品过湿,可先将样本10,000 x g,离心30s,尽可能多的去除液体。问题2:DNA产量低怎么办?解决思路:· 样本微生物含量低:【1】增加样本量【2】杨浦区FastDNA SPIN土壤试剂盒土壤DNA提取哪家好
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