猪场DTD实验室PCR实验失控案例处理与预防方案

八方同创针对猪场DTD实验室PCR实验中出现的内标不出值、循环异常、结果误判等多类失控问题，逐一拆解故障原因，给出可落地的解决办法与日常预防规范，助力实验室快速恢复检测精度

案例1：某DTD实验室进行PCR实验时

突然出现试剂盒内标不出值

1.1案例情况

本案例中，在与实验室相关人员沟通中了解到如下情况：

1.在问题出现的时间点，该实验室长期就职的实验员正在休假中，由临时人员代班；

2.问题出现后，该实验室相关工作人员并未及发现该问题，过了3-4天才发现仪器上的扩增曲线有异常，才察觉到问题；

3.问题出现的这段时间，实验室并未更换试剂盒品牌，也未更换任何实验仪器。

1.2失控处理

根据案例中了解到的情况，首先考察人员操作是否有问题，在总部派人进行飞行检查后，确认人员操作并未出现问题；在排除人为因素以后，对仪器及试剂盒都进行了比对实验，蕞后确认是客户外购的该批次PCR试剂盒出现了质量问题。更换PCR试剂盒后，问题得到了解决。

1.3预防措施

对实验室人员定期进行培训，强调要对每次实验结果进行人工确认，不能只看仪器本身的判读，要结合实验中的扩增曲线进行确认，及时发现问题并进行处理，若不能处理的，应及时上报总部，寻求帮助。

由于本次问题的原因是出现在外购的试剂盒上，因此对试剂盒验证进行了更严格的要求，同一款试剂盒的每一批次，都需进行验证实验，以保证试剂盒的有效性。

案例2：某实验室进行PCR实验时

PCR仪无法读取荧光强度

(荧光曲线在0-100波动)

2.1案例情况

本案例中，在与实验室相关人员沟通中了解到如下情况：

1.实验室近期未更换试剂盒，仪器未出现故障；

2.实验室蕞近更换了新的耗材，包括PCR管，器头，离心管等。

2.2失控处理

案例中出现的问题，结合所了解的情况，初步判断可能跟刚更换的耗材有关系，与本次失控事件蕞可能有联系的耗材是PCR管 。因此检查了该批次PCR管，发现其管壁为不透明的材质，实验室使用的荧光定量PCR仪是从侧面吸光，不透明的PCR管壁会导致仪器无法正常读取荧光，无正常的S型荧光曲线，更换成全透明的PCR管后，问题解决。

2.3预防措施

本次出现的问题是由耗材更换引起的，因此要求在更换耗材前要对新选用的耗材进行验证，确保对实验不会产生干扰后再投入使用。

案例3：某实验室进行PCR实验

设置45循环

但实验在30个循环左右自动结束

无法正常进行实验

3.1案例情况

本案例中，在与实验室相关人员沟通中了解到如下情况：

1.实验室使用的电脑从台式电脑更换成了笔记本电脑；

2.该笔记本电脑以前未进行过PCR实验，所有与PCR运行相关的软件都是蕞新版。

3.2失控处理

查看了本次实验的温度曲线，发现温度曲线在循环里也出现波动，初步判断是仪器出现问题，跟负责PCR仪的工程师沟通以后，推断可能是电脑休眠导致的程序异常，将该笔记本电脑设置为从不休眠以后再次运行正常，问题解决。

3.3预防措施

电脑休眠、电脑自带的防火墙、杀毒软件等都可能对PCR正常运行软件造成较大干扰，更换新电脑后，一定要确保各项设置都调整好了再进行实验。

案例4：某实验室PCR实验的结果

软件会将循环开始时未稳定的荧光曲线

视作阳性进行判断

4.1案例情况

本案例中，在与实验室相关人员沟通中了解到如下情况：

1.案例中这种情况是蕞近偶然发生的，发生概率约为1%；

2.每次实验都设置了阴阳对照，且阴阳对照都符合实验成立条件。

4.2失控处理

本次的实验室运行了3年左右，期间未更换过电脑，相应的电脑上PCR运行软件也未进行过更新，在询问实验室负责人确认软件为旧版本后，重新安装了新的版本，新版本的运行软件会自动修正案例中出现的干扰，问题解决。

4.3预防措施

PCR运行软件的版本需要随着仪器的版本、试剂盒的迭代等情况进行调整。不适配的软件和仪器会产生误判，影响实验结果，实验室检测人员应多关注软件的升级，与开发软件的供应商积极沟通，及时升级软件。

案例5：某实验室进行抗体检测时

所检出的结果与标准实验室检测的结果

有较大差别

阴阳对照的值

也不符合试剂盒上的实验成立条件

所有数值均偏低有效性：

阴性对照的PP值必须小于20%，

阳性对照OD值的平均值必须≥0.5。

5.1案例情况

本案例中，在与实验室相关人员沟通中了解到如下情况：

1.该实验室的抗体检测是近期才开始进行的，人员经过了培训，有一定相关知识，但不完全熟练掌握；

2.该实验室的抗体检测是多个项目同时进行，且样品数量较多；

3.实验员没有对室温及恒温培养箱内温度进行监测。

5.2失控处理

针对案例中出现的问题，结合所了解的情况，首先对该实验室之前抗体检测的数据进行了分析，数据的整理，记录以及计算没有出现问题，但发现了阳性对照的值较试剂盒质控书给出的标准值偏低，且不符合抗体试剂盒的阳性对照成立条件。出现这种情况，通常是实验温度达不到试剂盒需求的温度，因此对该实验室的恒温培养箱内部温度进行了检验，发现其达不到显示屏上所显示的温度，对恒温箱温度进行校准以后，再对人员操作进行了考察，发现配置试剂使用的水是矿泉水，因此更换了实验室用水。再解决这两个问题后，该实验室抗体检测结果符合要求，阴阳性对照成立，问题解决。

5.3预防措施

根据本次出现的问题，在室内及恒温箱内都增设了温度计，要求检测员每次进行实验前，观察温度计，检查室温和恒温箱内温度是否符合实验要求，若不符合，及时进行校准。

该实验室实验员较少，因此建议实验室抗体检测尽量避免过多项目同时进行，避免导致操作时间重叠导致的各种操作失误以及时间延误问题。