细菌分离培养与药敏试验｜菌落鉴定、染色、药敏检测技术全梳理

常用分离培养方法PART/  01平板划线分离培养法<<<<常用于纯化菌株，分离单菌落。根据样本含菌量的多少，又可将其分为分区划线分离法和连续划线分离法。

其中，分区划线分离法适用于含菌量丰富的细菌，连续划线分离法适用于含菌量少的细菌。稀释涂布平板法<<<<

常用于筛选菌株或纸片扩散法药敏试验的细菌接种。

常用细菌培养方法PART/  02根据不同的培养目的，可选用不同的培养方法。通常把细菌的培养方法分为需氧培养、二氧化碳培养、厌氧培养和微需氧培养。

需氧培养：适用于需氧菌或兼性厌氧菌。

二氧化碳培养：适用于需要在含有5%-10%二氧化碳的环境下生长的菌。

厌氧培养：适用于兼性厌氧菌或专性厌氧菌。

微需氧培养：适用于需要在含有5%-6%氧气，5%-10%二氧化碳和85%氮气的环境中生长的菌。

细菌生长特性PART/  03本篇内容主要讲述固体培养基上菌落的生长特性。菌落是指单个细菌经过分裂繁殖所形成的肉眼可见的单个细菌集团。

根据表面特征的不同，可将菌落分为以下3种类型：光滑型菌落（S型菌落）：菌落表面光滑、湿润、边缘整齐。粗糙型菌落（R型菌落）：菌落表面粗糙、干燥、呈皱纹或颗粒状，边缘大多不整齐。粘液型菌落（M型菌落）：菌落粘稠、有光泽、似水珠样。根据溶血特征的不同，可将菌落分为以下4种类型：

α溶血：又被称为草绿色溶血，即菌落周围的培养基出现1-2mm的草绿色环，为高铁血红蛋白所致。β溶血：又被称为完全溶血，即菌落周围的培养基形成一个完全清晰透明的溶血环，是细菌产生的溶血素使红细胞完全溶解所致。γ溶血：即不溶血，菌落周围的培养基没有变化，红细胞未出现溶解或缺损情况。双环：菌落周围培养基形成两个溶血环，即完全溶血后，还出现一个部分溶血圈。气味：生姜气味（铜绿假单胞菌）、微生物组织腐坏降解的恶臭味（厌氧梭菌）、巧克力烧焦的臭味（变形杆菌）和泥土味（放线菌）等。

常用细菌染色方法PART/  04革兰氏染色：细菌学中被适配多品类使用的一种鉴别染色方法。

革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌之间的主要区别在于肽聚糖层的厚度和外部脂质膜的存在与否。革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，在革兰氏染色试验中呈红色至粉红色。革兰氏阳性菌具有较厚的肽聚糖细胞壁结构，在革兰氏染色试验中呈紫色/蓝色。其他染色方法：抗酸染色（主要对分枝杆菌属进行初步鉴别）、荚膜染色和芽孢染色等。

药敏试验PART/  05药敏试验是抑菌类生物制剂药敏感性试验的简称，是指在体外测定细菌对抑菌类生物制剂药的敏感程度或耐药水平，以指导临床合理选用药物的微生物学试验。纸片法（K-B法）：一种可以定性测定细菌对药物的敏感程度的方法。

敏感性是指细菌对抑菌类生物制剂药的敏感程度。一种抑菌类生物制剂药如果以很小的剂量即可抑制、杀灭细菌，则表示细菌对这种抑菌类生物制剂药“敏感”；反之，则“不敏感”或“耐药”。

药敏实验的结果，应按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准，具体对于不同的菌株，及不同的兽用抑菌类药物纸片需参照NCCLs的标准或者CLSI标准。

稀释法（肉汤稀释法、琼脂稀释法）：稀释法则可定量测定药物对细菌的抑菌类生物制剂活性，得到药物对该细菌的蕞小抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration, MIC）和蕞小杀菌浓度（Minimum Bactericidal Concentration, MBC）。

MIC：是测量药物抑菌类生物制剂活性大小的一个指标，即体外培养细菌18-24h，抑制细菌生长所需的蕞低药物浓度。MBC：即体外培养细菌18-24h，杀灭99.9%细菌所需的蕞低药物浓度。以上两个指标被普遍认为是检测药物抑菌类生物制剂的基本实验室测量标准，MIC值和MBC值越低，证明该药物对细菌的作用越好。同时，测定出其MIC值和MBC值，对临床用药具有重要的参考价值。