稳控自如：VitroGel® 3D培养全攻略

稳控自如：VitroGel® 类***3D培养的凝胶化优化与微环境构建全攻略

在类***培养过程中，稳定的3D基质环境至关重要。VitroGel® ORGANOID 作为即用型水凝胶体系，能够快速构建均一、可控的3D微环境。

对于典型的细胞培养应用，VitroGel® 在凝胶化过程中通常经历以下两个阶段：

① 启动凝胶化过程

VitroGel® 溶液在室温下稳定，且具有良好的流动性。通过将VitroGel® 溶液与细胞培养基混合，即可开始水凝胶的凝胶化/形成过程。在这一过程中，水凝胶分子会与培养基中的离子（如 Ca²⁺ 和 Na⁺）发生相互作用，从而形成基质结构（水凝胶）。

② 软性水凝胶形成/可注射型

当使用较少量的离子分子时，水凝胶的形成过程较为缓慢。在这一阶段，水凝胶较为柔软，并具有剪切变稀和快速恢复的力学特性，这使其易于转移至培养板中或用于注射操作。

③ 形成具有覆盖培养基的固体水凝胶

在软性水凝胶形成之后，在其上方加入额外的细胞培养基，可使更多离子分子渗透进入水凝胶基质中，并进一步促进水凝胶的交联饱和。在这一过程中，水凝胶将逐渐形成稳定的固体结构。

但在实际应用中，部分用户反馈：

·凝胶形成时间延长

·Dome 结构漂浮

·基质软硬不理想

·怀疑“没有凝胶成功”

这些问题真的来自产品本身吗？大多数情况下，其实源于操作细节。

本文带您快速排查，并提供优化方案。

一、为什么会出现凝胶延迟或不完全形成？

1. 混合比例是否正确？

VitroGel® 推荐标准比例为：VitroGel® : 细胞悬液 = 2:1（v/v）

偏离该比例会直接影响凝胶网络结构与稳定性。

标准示例：

·Dome法：200µL VitroGel® + 100 µL 细胞悬液

·包埋法：1 mL VitroGel® + 500 µL 细胞悬液

2. 凝胶时间是否异常？

在规范操作下：VitroGel®ORGANOID 在室温下 10-15 分钟即可形成柔软凝胶

若需要 40-60 分钟：

·可能比例不准确

·可能试剂未恢复至室温

·可能操作过程中有扰动

3. 培养板是否选择正确？

Dome方法必须使用：未 TC 处理培养板（Non-Treated Plate）

若使用 TC 处理板，可能出现：

·Dome 漂浮

·附着不良

·被误判为“凝胶失败”

4. 温度是否达标？

VitroGel® 使用前必须恢复至室温。

在37°C 条件下孵育会延缓凝胶化；

而在冷试剂或冰上操作则会加快凝胶化过程

二、让类***培养更稳定的优化建议

VitroGel® 的优势在于“可调控”，通过简单优化，可实现更适合原代类***的微环境。

1. 可调节基质刚度

对于敏感原代类***（如肠隐窝）：

可将 VitroGel® 与

DI 水 1:1 稀释后；再按 2:1 比例与细胞混合

·更柔软

·更适配原代组织

2. 精细控制生长因子浓度

如需R-spondin、Noggin、EGF：

在与 VitroGel® 混合时，使用

3× 浓度细胞悬液；

混合后水凝胶内**终浓度为 1×；上层覆盖培养基使用常规 1× 浓度即可；

·精细控制，减少变量干扰。

3. 合理控制细胞密度

建议优化阶段使用：2.0- 5.0*105 cells/mL

·过高密度可能物理性影响凝胶网络形成

4. 给凝胶“稳定时间”

混合后室温静置10-15 分钟；

凝胶形成期间避免移动、倾斜或摇晃培养板；

不要在凝胶未稳定前添加覆盖培养基；

·稳定的微环境，从细节开始。

三、写在***

类***培养的成功，70%取决于操作细节。

当流程标准化后，VitroGel® 能为您提供高度可控、可重复的3D培养平台。

如您正在进行：

·原代肠道类***

·**类***

·组织工程模型

·药物筛选3D体系

欢迎联系我们获取技术支持与样品测试！