万立科普 | 制备液相氨基柱使用

在药物研发、食品检测、化工分离等领域，制备液相氨基柱是一种常用的色谱柱，是糖类、有机酸、生物碱及天然产物分离纯化的“黄金搭档”。

但相比常规C18柱，氨基柱键合相更敏感、易水解，很容易出现寿命缩短、柱效下降等问题。

了解氨基柱的特点

氨基柱是以硅胶为基质，键合了氨基（-NH2）官能团的色谱柱。它既可以用于正相色谱模式，也可以用于反相和离子交换模式。

在正相模式下，主要用于分离糖类、醇类等极性化合物；在反相模式下，由于氨基的水溶性较好，常用于分离一些反相柱难以保留的强极性物质。

新柱活化

氨基柱出厂通常保存在100% 乙腈/正己烷中，严禁直接切换至含水/含盐流动相，须进行活化过渡，避免溶剂不互溶、盐析、相塌陷损伤填料。

正相模式活化

1、小流速（0.2~0.3mL/min，制备柱按比例降低）用异丙醇冲洗20 倍柱体积，置换出厂保存液；

2、用正相流动相（如正己烷 - 乙酸乙酯）平衡至基线平稳、压力稳定；

3、全程缓慢升压，严禁瞬间加压，防止柱床塌陷。

反相模式活化

1、先用100% 乙腈小流速（0.2~0.5mL/min）冲洗20 倍柱体积；

2、再用乙腈 - 水梯度过渡，每比例冲洗10倍柱体积；

3、然后切换至目标流动相，平衡4~6小时，直至保留时间完全重现。

操作过程中的关键细节

1、严格控制流动相pH值（常规硅胶基质氨基柱 pH 耐受范围：2.0~8.0，较合适3.0~7.0）

pH＜2：强酸性加速氨基键合相水解脱落，柱效快速下降；

pH＞8：碱性易导致硅胶基质溶解、柱床塌陷。

建议：酸性样品添加乙酸铵/甲酸铵缓冲液，避免用强酸；碱性样品控制时间，减少高 pH 下接触时长。

2、流动相配比（缓冲盐）

优先用挥发性盐，浓度≤50mM，减少残留；

盐与有机相混合时：先加水相、再加有机相，边加边搅拌，防止局部盐析；

严禁高盐流动相直接接触纯有机相，须梯度过渡。

3、样品前处理（很重要！）

流动相记得要过滤，一般采用0.22um的滤膜过滤。如果流动相中还含有缓冲盐类，建议在用流动相之前先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。

4、保持恒温

尽量在恒温条件下使用（如配备柱温箱），温度波动会影响分离重复性，尤其在正相模式中更为明显。

日常维护与保存规范

每次实验结束，须按 “去盐→除杂→保存” 三步冲洗，不可省略！

1、实验结束后，流动相如果含有缓冲盐，用不少于缓冲盐比例的纯水/乙腈冲洗至少20倍柱容量，但要注意纯水比例不宜超过40%(例如用的流动相是20%的缓冲液，则可以用25%比例的纯水将缓冲盐缓慢洗脱出来)，再用100%乙腈冲洗至少10倍柱容量，并保存在100%乙腈中。

2、短期保存：可用乙腈保存；长期保存：用异丙醇充分置换，然后用正己烷保存。

注意：长期保存后重新启用，按“新柱活化”步骤重新平衡，不可直接上样！

常见问题与解决办法（万立实验室实战经验，可在日常实验中采纳哦）

万立仪器・专注制备色谱・守护每一次可靠分离

氨基柱虽“娇贵”，但规范活化、严控pH、正确冲洗与保存，可以稳定使用、大幅延长寿命。万立仪器坚持“以技术为主导、以服务为保障”，不仅提供高性能制备液相色谱仪，更提供全流程技术支持与定制化分离方案。

如您在使用中遇到任何问题，欢迎随时联系万立技术工程师，我们将一对一为您解答！

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