标准菌株保存过程中污染霉菌，该如何并规范保存？

南京乐诊在长期的标准菌株供应与技术服务中，深知标准菌株保存过程中污染霉菌，是实验室头疼的问题之一。霉菌污染具有繁殖快、扩散快、清理难、易复发的特点，不仅会导致污染菌株报废、造成成本损失，还可能扩散至整个菌株库，污染其他菌株，同时霉菌孢子易引发实验室环境污染，危害操作人员健康。标准菌株作为检测的标准物质，其纯度与安全性直接决定检测结果的可靠性。针对这一严重痛点，南京乐诊基于微生物实验室 GMP 管理规范与菌株保藏技术，从霉菌污染成因、方法、规范保存体系、防控措施四大维度，为客户提供彻底解决方案，杜绝霉菌污染，保障标准菌株安全保存。

标准菌株保存中污染霉菌，是环境、操作、储存、原料四大环节存在漏洞，霉菌孢子通过多种途径侵入菌株。一是环境霉菌污染（主要来源）：实验室、超净台、冰箱、培养箱长期未清洁消毒，霉菌孢子大量滋生，漂浮在空气中；菌株保存区域（如冰箱）与活菌样品、培养基、污染物品同柜存放，交叉污染；实验室湿度超标（超过 60%）、通风不良，为霉菌生长提供适宜环境；操作区域墙面、台面有霉点，孢子扩散至操作环境。二是无菌操作不达标：菌株复苏、传代、保存时，超净台未彻底消毒（紫外时间不足、未擦拭消毒），操作人员口罩、手套佩戴不规范，呼吸、手部携带霉菌孢子侵入菌株；工具（接种环、移液管、冻存管）灭菌不彻底，残留霉菌孢子；操作时间过长，菌株暴露在空气中，吸附霉菌孢子。三是储存条件不当：菌株保存冰箱温度不稳定、频繁开门，导致水汽凝结，培养基表面潮湿，利于霉菌生长；冻存管、斜面密封不严，霉菌孢子侵入；保存培养基营养过丰富、水分含量高，易滋生霉菌；菌株保存时间过长，培养基老化、污染风险增加。四是原料与产品问题：保存培养基、甘油、复苏液灭菌不彻底，残留霉菌孢子；冻干菌株原始包装破损，运输中侵入霉菌孢子；使用劣质无菌耗材（冻存管、吸管），携带霉菌。

霉菌污染的方法，需根据污染程度分级处理，兼顾有效性与菌株安全性。轻微污染（霉菌菌落单一、较小，未扩散至目标菌）：立即将污染菌株转移至超净台隔离操作；用无菌接种针挑取霉菌菌落，彻底；将目标菌转移至新鲜南京乐诊保存培养基，36℃培养 24 小时；连续纯化 2-3 代，每代均检查无霉菌后，重新保存。中度污染（霉菌菌落扩散、部分覆盖目标菌）：用无菌吸管吸取少量无菌生理盐水，冲洗霉菌污染区域，吸干后挑取目标菌单菌落；连续纯化 3-4 代，每代进行霉菌检查（显微镜观察有无菌丝、孢子）；确认无霉菌后，重新冻存保存。重度污染（霉菌全覆盖、目标菌被包裹、产生大量菌丝孢子）：无价值，立即将污染菌株密封，放入含 75% 酒精的容器中浸泡消毒 24 小时后，高压灭菌废弃，严禁随意丢弃，避免孢子扩散。

建立规范的三级菌株保存体系，从根本上防控霉菌污染。一级（原始储备株）：购入的冻干标准菌株（0 代），2-8℃冷藏保存，用于制备二级储备株，不直接用于实验，全程密封，减少开启次数。二级（中间储备株）：原始株复苏后，用南京乐诊保存培养基（含霉菌抑制剂）培养，加入 20% 无菌甘油，分装至无菌冻存管，-80℃温保存，每管 0.2mL，标注菌株名、代次、日期，可保存 2-3 年，传代 1-2 次。三级（工作株）：二级储备株复苏后制备，用于日常检测，2-8℃斜面保存或 - 20℃冻存，保存期 1-3 个月，传代 3-5 代，定期更换。

防控措施：环境管控，每月对超净台、培养箱、冰箱进行彻底清洁消毒（75% 酒精擦拭、紫外消毒 30 分钟）；菌株保存冰箱，严禁存放活菌样品、培养基、食物；实验室湿度控制在 40%-60%，通风良好，定期检测霉菌污染；发现霉点立即清理消毒。操作管控，菌株操作全程在百级超净台内，操作前紫外消毒 30 分钟，穿戴无菌服、口罩、手套；工具高压灭菌后使用，一次性耗材无菌包装开封即用；操作时间控制在 30 分钟内，减少菌株暴露。储存管控，冻存管、斜面用封口膜严密密封，-80℃保存避免水汽凝结；遵循 “先进先出”，定期清理过期菌株；保存培养基添加少量霉菌抑制剂（如制霉菌素），抑制霉菌生长。质量管控，每批次保存培养基进行无菌试验，确保无霉菌；每月对保存菌株进行检查，发现污染立即处理；定期（每 3 个月）复苏验证菌株活性与纯度。

南京乐诊支持：提供含霉菌抑制剂的保存培养基、无菌冻存管、甘油保护剂；提供菌株保存操作视频与 SOP 手册；开展霉菌污染防控与菌株保存培训；技术团队协助客户建立菌株库，优化保存环境与流程；提供高纯度、低污染风险的标准菌株，每批次经无菌验证。

南京乐诊始终守护标准菌株安全，通过科学、规范保存、防控，帮助客户彻底解决霉菌污染问题，保障标准菌株库纯净、安全、稳定，为实验室检测工作筑牢根基。