八方同创 猪场药敏试验简易操作指南 收藏！

在猪场养殖过程中，细菌性疾病防控是保障养殖效益的关键，而药敏试验是科学选药、精确防控的he心手段。为帮助猪场规范开展药敏试验，提升细菌性疾病防控效率，特整理标准化简易操作流程，全流程兼顾专业性与实用性，适配猪场实际检测需求。

一、样本采集注意事项

提前准备无菌采集工具及耗材，全程遵循无菌操作；

于病猪症状典型时新鲜采集样本，无菌袋 / 容器盛放；

样本短时间低温冷藏保存，禁止冷冻，需尽快送检检测。

二、试验前期准备

（一）设备耗材

备好生化培养箱、超净工作台、各类培养皿、药敏片、麦氏比浊管、移液器等 18 类he心设备耗材，可根据实验室条件自备或采购灭菌成品。

（二）前期操作

玻璃制品灭菌处理，实验前③0 分钟开启超净工作台；

培养箱调至 37℃（特殊细菌按需求调整），点燃酒精灯消毒操作环境；

药敏片提前置于室温平衡 20 分钟，可根据猪场用药及兽医指导选择氨苄西林、庆大霉素等品类。

三、he心操作流程

样品细菌涂布：无菌操作挑取样本，以 S 型划线或制备菌悬液棉拭子涂布于培养基；

初培养：培养皿倒置放入 37℃培养箱，孵育 16-24 小时；

分离单菌落：采用分区划线法，在超净台内挑取培养物涂布分离单一菌落；

目标菌标准化涂布：挑取目标菌制备菌悬液，调至 0.5 麦氏标准，取 50-100μL 滴于培养皿并均匀涂布；

贴药敏片：镊子灭菌冷却后取药敏片贴于培养基，轻按贴合，平皿中间 1 片、外周等距粘贴，片间距＞24mm，离皿圈＞15mm，贴好后封口膜密封；

二次培养：同初培养条件孵育 16-24 小时；

结果测量：用刻度尺在培养皿外侧量取各药敏片抑菌圈直径并记录。

四、结果分析判定

抗jun药物在培养基中梯度扩散，形成的抑菌圈大小反映细菌对药物的敏感程度，抑菌圈越大则敏感性越高，无抑菌圈为耐药。结合各药物判定标准，根据抑菌圈直径将结果划分为敏感、中介、耐药三个等级，为临床选药提供直接数据支撑（如庆大霉素≥15mm 为敏感，≤12mm 为耐药；氟苯尼考≥18mm 为敏感，≤12mm 为耐药）。

五、关键注意事项

全程严格无菌操作，避免杂菌污染导致结果误差，防止致病菌交叉感ran；

更换药敏片时需灼烧镊子口，避免药物混淆；

药敏片需 - 20℃低温干燥保存，取出后室温平衡再打开，防止冷凝水影响药效；

金属接种环使用前后规范灼烧，且冷却后再接触菌种，避免高温致死菌种；

培养皿全程倒置培养，防止冷凝水滴入培养基影响菌落生长。

六、实操优化建议

试验过程中用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌质控菌株做质控，验证试剂及操作有效性；

借助 PCR 检测手段鉴别疑似病原，开展针对xing药敏试验，提升检测效率；

配套使用猪链球菌、副猪嗜血杆菌等猪细菌性疾病荧光 PCR 检测试剂盒，快速锁定病原，与药敏试验形成技术互补，实现 “精确诊断 + 科学选药” 一体化防控。

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