小鼠aNSCs与脑类***的CERO培养进展优势

基于CERO生物反应器建立小鼠aNSC培养体系***将CERO 生物反应器应用于小鼠 aNSCs 培养、脑类***开发及脑*组装体构建，通过与传统 6 孔悬浮培养板、96 孔 ULA 板对比，在可扩展性（单管容量达 5000 万细胞、支持 200 + 类***培养）、生长动力学（细胞传代频率降低 2-4 倍、类***尺寸均匀）、长期培养稳定性（培养时长超 5 个月，较传统方法延长 1.6 倍）三大维度展现***优势，还成功构建出相互连接表面积超 50% 的脑聚集体模型，人工操作减少 50%，为相关研究提供更可靠的 3D 培养体系。

一、项目概述

项目定位：***将CERO 生物反应器应用于小鼠成年神经干细胞（aNSCs）培养、脑类***开发及脑*组装体构建，填补其在小鼠 aNSCs 培养中的应用空白。**背景：传统 3D 培养方法缺乏高级研究所需的可重复性，而可重复的 3R（替代、减少、优化）3D 培养系统需求日益迫切，项目与 OLS 合作验证 CERO 的应用价值。

二、**优势对比（CERO vs 传统培养方法）

三、脑聚集体培养的关键突破

l 传统局限：脑类***与*细胞球体的共培养模型（脑聚集体）中，两者接触面积极低（<10%），无法模拟脑*被健康脑组织包围的临床实际环境。

l CERO 解决方案：成功构建相互连接表面积超过 50% 的聚集体模型，精细模拟**侵袭过程（H&E 染色显示脑类***向**组织外侧生长超半数）。

l 性能提升：Ki-67 染色显示胶质瘤及类***组织均有增殖活性，Cas-3 染色表明细胞凋亡减少，存活率显著提高，模型更稳定持久。

四、操作流程概要

1. 预培养：将先前分化的脑类***与 GL261 胶质瘤球体（10,000 个细胞 / 孔）接种于 96 孔 ULA 板，预培养 3 天。

2. 共培养：转移至新 96 孔 ULA 板，72 小时内形成细胞间紧密连接。

3. 分组培养：72 小时后，半数聚集体转移至 CERO 管，另一半保留在 96 孔 ULA 板，继续培养 48 小时（累计 120 小时）。分析：对组装体进行固定、切片，采用 H&E、Ki-67（增殖标记物）、Cas-3（凋亡标记物）染色分析。

五、项目价值

CERO 生物反应器***提升了类***和脑聚集体的培养效率与质量，减少人工操作，为脑*等相关疾病的体内研究提供了更贴近临床实际的替代模型，开辟了新的研究途径。

关键问题

问题 1：CERO 生物反应器在长期培养稳定性方面，较传统 6 孔悬浮培养板有哪些**提升？

答案：传统 6 孔悬浮培养板*能稳定培养 3 个月，之后类***存活率下降、出现凋亡**；CERO 可实现超 5 个月的稳定培养（延长 1.6 倍），类***保持活性、**持续增殖，形态圆润均匀，无需更新培养基，大幅提升长期研究的可行性。

问题 2：该项目在脑聚集体培养中，解决了传统模型的什么**痛点？实现了怎样的关键突破？

答案：传统脑聚集体模型的**痛点是脑类***与*细胞球体接触面积极低（<10%），无法模拟脑*被健康脑组织包围的临床微环境；CERO 的关键突破是构建出相互连接表面积超过 50% 的聚集体模型，精细再现** - 组织相互作用，且细胞凋亡减少、增殖活性提升，模型稳定性更强。

问题 3：CERO 生物反应器在可扩展性和人工操作方面，较传统培养方法的具体优势数据是什么？

答案：可扩展性上，CERO 单管培养容量达5000 万细胞，支持200 + 类***培养，较 6 孔板（每孔 10-30 个类***）容量提升 20 倍，单位面积支持的类***数量提升 15 倍；人工操作上，较孔板培养减少50% 的培养基更换次数及操作时间，***提升培养效率。

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