使用延时无创活细胞成像分析系统进行cancer研究的实验步骤

来源：发布时间：2025-10-24

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一、实验准备

仪器设备：将 HoloMonitor® M4 放置在培养箱内，并确保仪器稳定，连接好相关电源及数据线；准备配套的计算机，配置需满足系统要求，安装好 HoloMonitor® M4 App Suite 软件。

实验材料：选择合适的细胞培养容器，如 6 孔板、24 孔板、96 孔板或培养皿等（参考推荐容器列表选择），准备对应容器的 HoloLid™和容器支架；获取用于实验的*细胞系，如乳腺*细胞系 JIMT-1、三阴性乳腺*细胞 MDA-MB-231 等，并准备相应的细胞培养基、血清、***等细胞培养试剂。

耗材准备：根据实验需求准备移液枪、移液器吸头、无菌离心管等耗材，所有耗材需经过无菌处理。

二、细胞接种与培养

细胞复苏：从液氮罐中取出冻存的*细胞，迅速放入 37℃水浴锅中解冻，解冻后将细胞转移至离心管，加入适量培养基，1000 - 1500rpm 离心 5 分钟，弃上清，加入新鲜培养基重悬细胞。

细胞计数：使用细胞计数仪或血球计数板对重悬后的细胞进行计数，确定细胞浓度。

细胞接种：根据实验设计，将*细胞以合适的密度接种到培养容器中。如进行细胞增殖实验，可接种约 5% 汇合度（约 6000 - 11000 个细胞 /cm² ）的细胞；接种后轻轻晃动培养容器，使细胞均匀分布。

细胞培养：将接种好细胞的培养容器放入培养箱，在适宜的温度（通常为 37℃）、湿度及气体环境（5% CO₂ ）下培养，让细胞贴壁生长 2 - 24 小时。

三、HoloMonitor® M4 系统设置与校准

启动软件：打开计算机，启动 HoloMonitor® M4 App Suite 软件，等待软件完成初始化，软件界面加载完成后，确保仪器各组件连接正常。

自动校准：在软件中选择自动校准功能，按照软件提示进行操作，完成校准后，检查校准结果是否符合要求（如光路校准、焦距校准等，校准成功会有相应提示），确保仪器处于比较好工作状态。

四、实验样本准备与上机

样本处理：若实验涉及药物处理*细胞，在细胞贴壁后，根据实验设计配置不同浓度的药物溶液，小心加入到培养容器中，注意药物的**终工作体积需符合 HoloLid™使用要求（参考不同容器对应的工作体积数据）。

安装 HoloLid™与放置样本：将无菌的 HoloLid™替换培养容器的标准盖子；把装有细胞样本的培养容器放置在对应的容器支架上，确保容器平行放置且固定良好（使用多孔板时，将有缺口的一角朝左放置）；将容器支架连同样本小心放置在 HoloMonitor® M4 的载物台上。

五、实验参数设置与运行

选择实验类型：在 HoloMonitor® M4 App Suite 软件中，根据研究目的选择相应的实验模块，如细胞增殖实验选择 “Kinetic Proliferation Assay”，细胞迁移实验选择 “Single Cell Tracking” 或 “Wound Healing Assay” 等。

参数设置：设置成像时间间隔、成像时长等参数。例如，进行细胞增殖实验，可设置每隔 1 - 2 小时采集一次图像，成像时长根据细胞增殖速度确定，一般为 24 - 96 小时；若进行细胞迁移实验，对于迁移速度较快的*细胞，可缩短成像时间间隔至 15 - 30 分钟。

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开始实验：确认参数设置无误后，点击 “Start” 按钮开始实验，HoloMonitor® M4 开始自动采集细胞图像，在实验过程中，可通过软件界面实时查看细胞状态和成像进度。

六、数据采集与分析

数据采集：实验过程中，HoloMonitor® M4 持续采集细胞的全息图像，软件自动记录相关数据，如细胞计数、细胞汇合度、细胞形态参数（面积、体积、厚度等）、细胞运动参数（迁移距离、速度等）。

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数据分析：实验结束后，使用 HoloMonitor® M4 App Suite 软件的分析功能对数据进行处理。如在细胞增殖实验中，软件自动生成细胞数量随时间变化的曲线、细胞汇合度变化曲线；在细胞迁移实验中，分析细胞的迁移轨迹、计算迁移速度和迁移方向等；还可利用软件的导出功能，将数据导出至 Excel 等软件进行进一步的统计学分析，如计算平均值、标准差，进行***性差异检验等。

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