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本发明涉及一种快速提取血液和口腔拭子基因组DNA的方法。背景技术:近年来,随着荧光PCR技术的不断成熟。该技术在科研及检验领域得到了应用,成为分子生物学领域不可或缺的一项重要技术。在进行遗传背景分析过程中,血液、唾液和口腔拭子成为重要的生物分析样本。但是,由于血液、唾液和口腔拭子中存在有很多PCR反应物,例如血液中含有血红素,蛋白质,脂肪,抗凝剂等,唾液和口腔拭子含有蛋白质,脂肪,抗凝剂等,使得用血液、唾液和口腔拭子直接进行荧光PCR反应变得尤为困难。因此,现在临床上往往先要从血液、唾液和口腔拭子样本中纯化出DNA,才能进行样本的DNA扩增。提取血液、唾液和口腔拭子基因组的方法种类非常多,传统酚氯仿抽提法,高盐盐析法,模离心柱吸附法,磁珠法,等等。经典的血液核酸提取方法包括几个过程。1.通过低渗液涨破红细胞,将血红素物质释放出来,然后离心,清洗去除血红素。2.通过裂解液裂解白细胞,释放核酸物质。3.通过离心柱或纳米磁珠特异性吸附核酸物质,去除其他杂质。4.通过漂洗液洗掉挂在离心柱或纳米磁珠表面的化学试剂残留和蛋白残留。5.加入洗脱液将核酸从离心柱或纳米磁珠上洗脱下来。 湖北口腔拭子报价行情包装后的拭子应贮存在2℃ ~30℃,相对湿度40%~90%的无腐蚀性气体、通风良好、阴凉干燥、清洁的环境中。

本发明的特征在于:应用本发明的血液基因组DNA提取方法在10分钟内提取血液基因组可用于荧光PCR扩增检测,主要步骤如下。(1)将**管颠倒混匀后,吸取100μL血液或者吸取100μL口腔拭子样本保存液至,加入200μL的核酸释放剂,涡旋混匀,然后5000g离心30s,弃上清,获得细胞沉淀。(2)将步骤(1)中得到的血液细胞沉淀中再加入200μL核酸释放剂,涡旋振荡1min,至沉淀完全散开,然后5000g离心30s,弃上清。(口腔拭子样本则无需进行此步骤)。(3)向步骤(2)所获得的沉淀中加入50μL核酸释放剂,涡旋振荡1~2min;室温放置5min,12000g离心30s,取上清液即为提取的基因组DNA;所述的核酸释放剂组成为20mM~80mM的氢氧化钠溶液、~、~、~、~***钠、~3%甲酰胺;所述荧光PCR反应液组成为ROX、TaqMan探针、引物、dNTP、dUTP、UDG、BSA、聚合酶及缓冲液。附图说明图1为实例1检测的8份血液样本平行实验的荧光扩增曲线图。图2~图5为实施例1提供的四份血液样本的三次平行实验的荧光扩增曲线图。图6为实施例2对比实例1提供的对8份血液样本平行实验的荧光扩增曲线图。具体实施方式为了使本领域技术领域人员更好地理解本申请中的技术方案。
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这款口腔拭子目前非常多的用于疾病筛查,基因检测,分子诊断,HIV采集细胞,BINGDU 微生物等采集。湖北口腔拭子报价行情
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