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同样唾液和口腔拭子中核酸提取方法与血液的提取方法相似包括以下4个过程:1.通过裂解液裂解口腔脱落细胞,释放核酸物质。2.通过离心柱或纳米磁珠特异性吸附核酸物质,去除其他杂质。3.通过漂洗液洗掉挂在离心柱或纳米磁珠表面的化学试剂残留和蛋白残留。4.加入洗脱液将核酸从离心柱或纳米磁珠上洗脱下来。传统的提取方法由于核酸提取纯化过程耗时长,成本较高,步骤繁多,增加了基因污染的风险。因此需要一种血液、唾液和口腔拭子样本经过简单处理就可以作为模板进行荧光PCR扩增检测方法,满足科研和医学领域快速检测的要求。技术实现要素:本发明提供了一种快速提取血液和口腔拭子基因组DNA的方法。该发明通过快速简单处理口腔拭子和血液样本,且无需纯化可直接用于荧光PCR扩增的DNA。10分钟内即可得到应用于ARMS-PCR反应体系的模板DNA。同时优化ARMS-PCR荧光体系,在反应液中加入防污染UDG酶以及提高Taq酶稳定性的的BSA,从而实现血液和口腔拭子基因组快速荧光PCR扩增检测。该方法快速简单,成本低廉,检测灵敏,且用该方法提取的基因组与商品化试剂盒提取的基因组的检测结果相近。辽宁泡沫口腔拭子然后用完的废弃掉的拭子请按照您所在地区法例进行处理。
加入20μteinaseK溶液,混匀。加入200μL缓冲液GB,充分颠倒混匀,在56℃放置14min(期间颠倒混合样品数次),溶液应变清亮,若未完全变清亮,延长裂解时间至完全变清亮。加人200μL无水乙醇,充分振荡混匀10s,此时可能会出现絮状沉淀。将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中),12,000rpm离心30s,倒掉废液,将吸附柱CB3放回收集管中。向吸附柱中加入500μLGD(已加入无水乙醇),12,000rpm离心30s,弃废液,将吸附柱CB3放回收集管中。向吸附柱中加入600μLPW(已加入无水乙醇),12,000rpm离心30s,弃废液,将吸附柱CB3放回收集管中。12,000rpm(~13,400×g)离心2min。将吸附柱放置新的,以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。向吸附柱中悬空滴加50~200μL洗脱缓冲液,室温放置2~5分钟,12,000rpm(~13,400×g)离心2min,将溶液收集到离心管中,测定浓度及纯度后,取3μL,加入到配制好的荧光PCR反应液,于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。用本发明和对照产品对8份样本同时进行荧光PCR扩增。结果如图6,本发明所有反应孔背景信号好、Ct值都在21~25之间,荧光扩增曲线呈典型的S型。
深圳市华晨阳科技有限公司(Huachenyangtech)深圳市华晨阳科技有限公司是一家拥有生物医学领域自研技术,专注于基因检测临床应用、检测试剂及自动化仪器研发生产的****。中心团队由生物学、医学、遗传学、生物信息学等领域的**人才组成。主营业务涵盖:核酸建库测序、荧光定量PCR、基因芯片等创新体外诊断试剂的自主研发生产、医学研究、基因早诊早筛、生殖医学、遗传病、微生物、病原体、慢病及健康管理等临床技术解决方案,以及生物药原材料研发制备。华晨阳科技以成为精细医学国际化创新主体为目标,在深圳拥有1000多平米的综合性研发实验室与cGMP生产车间,以及**的研发实验室。深圳华晨阳科技致力于生物医药、临床检测试剂的自主创新和国产化,将大型人群队列样本转化为医学相关的基因大数据,为国内外生物产业提供更便捷更快速的前沿生物信息技术服务。公司产品原研技术、规范生产、精细检测。 口腔拭子的优点是将产品进行环氧乙烷灭菌。
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