大肠杆菌表达系统的组成:(一)表达载体:一个完整的质粒载体需要有:复制起点、启动子、插入的目的基因、筛选标记以及终止子。(二)外源基因:在大肠杆菌表达体系中要表达的基因即外源基因,包括原核基因和真核基因。原核基因可以在大肠杆菌中直接表达,但是真核基因含有内含子,大肠杆菌不能对mRNA进行剪切,从而真核基因一般以cDNA的形式在大肠杆菌表达系统中表达。目的蛋白在大肠杆菌系统表达中的形式有二种。一种是在细胞内表现为不溶性的包涵体颗粒。另一种是在细胞内表现为可溶性的蛋白质。可溶性的目标蛋白质除可存在于细胞质中外,还可借助于本身的功能序列和大肠杆菌蛋白质加工、运输体系,至终分泌到周质空间,或外泌到培养液中。(三)宿主细胞:大肠杆菌蛋白表达过程中很重要的因素就是宿主细胞的选择。对于宿主细胞的选择主要根据宿主细胞各自的特征及目的蛋白的特性。对于是适合目的基因表达的宿主细胞主要有以下要求:①容易获得较高浓度的细胞。②能利用易得廉价原料。③不致病、不产生内毒。④发热量低、需氧低、适当的发酵温度和细胞形态。⑤容易进行代谢调控。枯草芽孢杆菌能够很好的提高作物抗病、抗寒、抗旱能力。巴氏真杆菌菌种
典型的金黄色葡萄球菌为球型,显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛,大多数无荚膜。革兰染色阳性。金葡菌具有抗干燥、耐热、耐低温、耐高渗的特性。在干燥环境中存活数月;空气中存在,但不繁殖。加热70℃1h,80℃30min不被杀死。在冷冻食品中不易死。在含有50%~66%蔗糖或15%以上食盐食品中才可被抑制,能在15%NaCl和40%胆汁中生长。金黄色葡萄球菌是院内传染及社区获得性传染的常见细菌之一。随着ß-内酰胺类维生素的普遍应用,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)随之增加,且引起的传染和病死率有逐年增加的趋势。MRSA可通过接触途径进行传播,即易感人群从携带者或传染者身上获得MRSA,导致传播流行。正灰绿正青霉枯草芽孢杆菌可以提高免疫球蛋白和抗体水平,增强细胞免疫和体液免疫功能,提高群体免疫的能力。
铜绿假单胞菌通过吸附在病原真类菌的菌丝上,并随着菌丝生长而生长,产生溶菌物质消解菌丝体,使菌丝发生断裂、解体、细胞质消解,有的菌丝原生质凝结;或者是次生代谢产物对病原菌孢子的细胞壁产生溶解作用,致使细胞壁产生穿孔、畸形等现象。铜绿假单胞菌不但能直接抑制植物病原菌,而且能通过诱发植物自身的抗病潜能从而增强植物的抗病性。生防铜绿假单胞菌能促进植物根系及植株生长,增强植物的抗病性,从而间接地减少病害发生。铜绿假单胞菌发酵分为:固体发酵、液体发酵、固液混合发酵3种工艺。
大肠杆菌的耐药可以是天然固有的,也可以通过后天的基因突变、基因转移获得。固有耐药性(intrinsicresistance),即耐药性的产生并不依赖于抑菌药物的存在,而是细菌细胞所固有的,与细菌的遗传和进化密切相关。固有耐药性包括自发基因突变导致的耐药性和细胞膜药物外输作用引起的耐药性。获得性耐药(acquiredresis—tance)是指细菌在抑菌药物选择性压力存在下经过基因突变,或细菌在生长过程中由于移动耐药因子的转移而获得的一种表型。主要包括移动因子和抑菌药压力作用下引起基因突变所导致的耐药性。就目前的研究现状来看,大肠杆菌的耐药性机制主要有5种:①抗s素作用位点的改变或新作用位点的产生。②酶对抗s素的修饰和破坏。③增加抗s素从大肠杆菌向细胞外的主动排出作用。④细菌外膜通透性的改变。⑤质粒介导的耐药性。一种耐药机制可以对多种抗s素表现为抗性,同一种抗s素也常常出现多种耐药性机制共同抑制的现象。金黄色葡萄球在含有血液和葡萄糖的培养基中生长更佳,需氧或兼性厌氧,少数专性厌氧。
大肠杆菌可以在多种底物上生存,并在厌氧条件下使用混合酸发酵,产生乳酸盐、琥珀酸盐、乙醇、乙酸盐和二氧化碳。由于混合酸发酵中的许多途径产生氢气,因此这些途径要求氢气水平低,例如大肠杆菌与耗氢生物如产甲烷菌或硫酸盐还原菌生活在一起。大肠杆菌在37°C(98、6°F)条件下生长至佳,但一些实验室菌株在49°C(120°F)条件下可以繁殖。大肠杆菌生长在各种确定的实验室培养基中,如LB培养基或任何含有葡萄糖、磷酸一铵、氯化钠、硫酸镁、磷酸氢钾和水的培养基。生长可以通过有氧或无氧呼吸来驱动,使用多种氧化还原对,包括酸、甲酸、氢和氨基酸的氧化,以及底物如氧、硝酸盐、富马酸盐、二甲基亚砜和三甲胺氮氧化物的还原。[21]大肠杆菌被归类为兼性厌氧菌。当氧气存在并可用时,它就使用氧气。然而,它可以通过发酵或厌氧呼吸在无氧条件下继续生长。在无氧条件下继续生长的能力对细菌来说是一个优势,因为在水占主导地位的环境中,细菌的存活率会提高的。枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的活性物质对致病菌或内源性影响的条件致病菌有明显的抑制作用。弗氏埃希氏菌菌种
铜绿假单胞菌普遍存在于假单胞菌属的其他细菌以及肺炎杆菌、大肠杆菌、霍乱弧菌等g-细菌中。巴氏真杆菌菌种
枯草芽孢杆菌为接种微生物,对菲与苯并芘都可进行吸附或生物降解,48h液相PAHs浓度达到平衡时,微生物对菲消除了98%,对苯并芘消除85%;接种的样品48h吸附等温线均呈线形,能较好地符合线性方程;在接种微生物情况下,沉积物与土壤对菲和苯并芘吸附特征均发生较大变化,对菲的吸附量增大约35倍,而对苯并芘的吸附量却降低了2/3左右;未接种微生物的土壤和沉积物对菲解吸率为20%,接种的样品组为2.9%,而对苯并芘的解吸结果与菲相反,未接种的对照组为4%,接种的样品组为3%。脲酶属于土壤中研究得比较深入的一种水解酶类,枯草芽孢杆菌是对尿素在土壤中转化及尿素利用率有重大影响的。巴氏真杆菌菌种
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