细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成,首先,要肉眼观察培养基是否混浊,然后,在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下观察细胞,生长状态良好,与黑点出现前相比,没有任何变化,那么,黑点的出现可能与以下几种情况有关:细胞生长过老,破碎的细胞残骸;血清质量不好,反复冻融的结果;配制培养基的pH值偏高,不宜细胞生长;配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除。含抗体的血清可作为预防或医治疾病之用。徐州优等胎牛血清哪家好
血清的安全风险因素主要有以下方面:地理因素,地理因素包括血清产地的流行病学趋势、基础设施情况以及血源供应量。措施得当可以预防能避免的动物疾病,同时产地国稳定可靠的基础设施,对保证供应链的安全也十分必要。血源是否充足则决定了血清是否可源源不断地持续供应。生产,生产遵循cGMP指南,则可保证血清质量,降低有关无菌过滤、掺加和标签错误的风险。cGMP为现场审核的开展提供了框架。生产过程中对血清进行有效的无菌过滤也是十分重要的。产品质控,有效的无菌过滤使得细菌污染的风险很低。对于支原体和病毒筛查,一些相关规范内部存在一定的方法灵活性,这使得采取不同方法进行支原体和病毒筛查成为可能,并且有时使得要筛查的病毒种类无需太多。有效辐照,要进一步降低外源因子风险,可对血清进行辐照(25–40 kGy)。但辐照并不能保证病毒污染的完全去除。辐照过量会导致FBS效能下降。徐州优等胎牛血清哪家好胎牛血清提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他等,能结合或调变它们所结合的物质活力。
非正规胎牛血清的产品会存在很多的问题:疫区来源,无合格质检使胎牛血清存在生物学污染:支原体、噬菌体、病毒、原虫等,会直接影响实验的结果和稳定。工艺不规范,导致采集的原血放置时间过长或操作不当导致溶血,血液中血细胞裂解,血清颜色呈红色或暗红色,这样的血清含有许多胞内产物,里面很多物质都会对细胞有刺激作用,影响实验的稳定性和数据的真实性。血清批次不稳定,添加来补?很多不法商贩拿到低廉的疫区原料血清进行加工生产,为了保障血清的培养效果会对血清进行处理,较为常见的是添加、转铁蛋白、BSA、生长因子等,还有的会和新生牛血清、培养基等勾兑,更有甚者用的根本就不是牛血清,此类操作对所有生物学实验都有巨大的影响。
血清的常见问题:保存方法,血清应保存在-5℃至-20℃。然而,若存放于4℃时,请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶,建议将无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。解冻方法:将血清从冷冻箱取出后,先置于2-8℃冰箱使之溶解,然后在室温下使之全溶。但必须注意的是,溶解过程中必须规则地摇晃均匀。避免产生沉淀物:解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-2℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),实验显示非常容易产生沉淀物。解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。胎牛血清的其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚。
胎牛血清参与细胞培养实验为细胞生长提供必要的营养成分,对于研究细胞的科学人士来说,血清都不会陌生,其中胎牛血清是实验操作的常客。一般而言,胎牛血清是指怀孕5-8个月的母牛被屠宰后,发育未完全的胎牛心脏穿刺后,通过一系列工艺处理获得。此时胎牛血中含有特殊的生长发育因子,一旦胚胎发育完全这些因子自动消失。胎牛血清的灭活,一般是用水浴加热的方式来加热已经完全解冻的血清,那么需要注意的是,加热的过程中一定要规则地将血清摇晃均匀。而之所以这么做,是为了能够让血清中的补体成分去活化。不过胎牛血清的灭活并不是强制的要求,客户可以自行选择是否进行灭火处理。每100ml人血清含有蛋白质6-8g,其中主要是白蛋白和球蛋白。徐州优等胎牛血清哪家好
血清对培养中的细胞起到某些保护作用:有一些细胞,如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶。徐州优等胎牛血清哪家好
胎牛血清的主要成分:蛋白质类包括白蛋白、球蛋白、α-巨球蛋白(抑制胰蛋白酶的作用)、胎球蛋白(促进细胞附着)、转铁蛋白(能结合铁离子,减少其毒性和被细胞利用)、纤维粘连素(促进细胞附着生长)等;多肽类,主要是一些促进细胞生长和分裂的生长因子,较为主要的生长因子是血小板生长因子,还有成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等,虽然在血清中含量很少,但对细胞的生长和分裂也起着重要作用;类,对细胞的作用是多方面的。包括:胰岛素:促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸,与促细胞分裂有关;类胰岛素生长因子:能与细胞表达的胰岛素受体结合,从而有胰岛素同样的作用:促生长:促进细胞增殖的效应;氢化可的松:血清中含有微量该成分,它可能具有促细胞贴附和增殖作用。但有人证明,血清中 的氢化可的松,在细胞密度较高时可能有抑制细胞生长和诱导细胞发生分化的作用。徐州优等胎牛血清哪家好
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