高效液相色谱分离原理
液—固
流动相为液体,固定相为吸附剂(如硅胶、氧化铝等)。这是根据物质吸附作用的不同来进行分离的。其作用机制是:当试样进入色谱柱时,溶质分子 (X) 和溶剂分子(S)对吸附剂表面活性中心发生竞争吸附(未进样时,所有的吸附剂活性中心吸附的是S),可表示如下:Xm nSa ====== Xa nSm
式中:Xm--流动相中的溶质分子;Sa--固定相中的溶剂分子;Xa--固定相中的溶质分子;Sm--流动相中的溶剂分子。
当吸附竞争反应达平衡时:
K=[Xa][Sm]/[Xm][Sa]
式中:K为吸附平衡常数。[讨论:K越大,保留值越大。]
带编码识别的自动化工作流程。赛默飞世尔Vanquish液相色谱系统厂家供应赛默飞世尔Vanquish 超高效液相色谱系统产品简介
Thermo Scientific™ Vanquish™ Duo UHPLC 系统,将两套梯度流路整合在一个超高效液相系统里,并能实现三种不同工作流程(双LC,串联液相或LCMS质谱前端,以及反梯度)这些工作流程可通过节约时间、减少每份样品的成本、在不额外增加工作台面的情况下提高仪器设备容量并更加高效地利用资源,以提升生产率。Vanquish Duo UHPLC 系统可在不影响性能、稳定性或易用性的情况下扩大 Vanquish 平台的优势。 上海专业高效液相色谱系统厂家直销一套设备可以同时实现在线分析与离线柱平衡再生,提升检测器或质谱在线利用率。
高效液相色谱相关术语
峰面积(peak area,A)—峰与峰底所包围的面积。
保留时间(retention time,tR)——从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。
理论塔板数(theoretical plate number,N)——用于定量表示色谱柱的分离效率(简称柱效)。
分离度(resolution,R)——相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值。也叫分辨率,表示相邻两峰的分离程度。R≥1.5称为完全分离。
《中国药典》规定R应大于1.5。
拖尾因子(tailing factor,T)——T=,用以衡量色谱峰的对称性。也称为对称因子(symmetry factor)或不对称因子(asymmetry factor)。
《中国药典》规定T应为0.95~1.05。
T1.05为拖尾峰。
高效液相色谱法有“四高一广”的特点:
①高压:流动相为液体,流经色谱柱时,受到的阻力较大,为了能迅速通过色谱柱,必须对载液加高压。
②高速:分析速度快、载液流速快,较经典液体色谱法速度快得多,通常分析一个样品在15~30分钟,有些样品甚至在5分钟内即可完成,一般小于1小时。
③高效:分离效能高。可选择固定相和流动相以达到比较好分离效果,比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。
④高灵敏度:紫外检测器可达0.01ng,进样量在μL数量级。
⑤应用范围广:百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析,特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析,显示出优势。
⑥柱子可反复使用:用一根柱子可分离不同化合物
⑦样品量少、容易回收:样品经过色谱柱后不被破坏,可以收集单一组分或做制备。
通过4个可编程的狭缝宽度(从1nm至8nm),调整灵敏度、线性和光谱分辨率,使其满足特定应用的要求。
Vanquish Duo 系统
无需额外的工作 - 自动梯度转换
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液相色谱中的大多数检测选项都需要通过某些物理化学性质来检测某一物质,例如用于紫外线吸收检测的发色团或用于质谱检测的离子化。电雾式检测技术可检测所有不同化学结构的非挥发性分析物,同时提供一致的响应、出色的灵敏度和较宽的线性范围。
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液相色谱理论
发展简况
液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相,称为经典液相色谱法,此方法柱效低、时间长(常有几个小时)。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography,HPLC)是在经典液相色谱法的基础上,于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。
它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相,故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography,HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography,HSLP)。也称现代液相色谱。
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