细胞冻存:取出冻存管,注明细胞名称,代数,日期。离心后,以无菌吸管吸弃上清,不要吸到底部的细胞沉淀。将细胞沉淀与冻存液充分混匀,根据计数结果,将细胞总数调节成细胞数量为5-10*105/ml为宜。将细胞冻存悬液分装进细胞冻存管中,一般2ml的冻存管中装入1-1.5ml冻存液为宜。严密封口后,使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞,使温度每分钟大约降低1℃。或者,将装有细胞的冻存管放入异丙的醇冻存盒中,然后将冻存盒置于–80℃条件下过夜。若无冻存盒及其他冻存装置,可以先将冻存管置于4℃30min,再-20℃冻存1h直至完全冷冻,再转移至-80℃冰箱过夜。第二天将已经冷冻的细胞转移到液氮容器中,置于液氮上方的气相空间中储存。将融化后的含细胞的冷冻保存液迅速析出置于新鲜培养基中充分混匀。广州无血清细胞冻存液报价
冻存温度:冻存温度是指能长期保存细胞的较低温度,在此温度下,细胞生化反应极其缓慢甚至停止,但经过长期保存,在复苏后仍能保持正常的结构和功能。 不同的细胞和生物体以及使用不同的冷冻保存方法要取得同样的冷冻保存效果,冷冻保存温度可以不同。但从实际和效益的观点出发,液氮温度-196℃是 目前较佳的冷冻保存温度。在-196℃时,细胞的生命活动几乎完全停止,但复苏后细胞的结构和功能完好。如果冷冻过程得当,一般生物样品在-196℃下均可保存十年以上。应用-70℃~-80℃保存细胞,短期内对细胞的活性无明显影响,但随着冻存时间延长,细胞存活率明显降低。在冰点到-40℃范围内保存细胞的效果不佳。广州无血清细胞冻存液报价无血清冻存液使用方法:加入适量的细胞冻存液,重悬细胞,调节密度至1-5x10*↑/mL。
细胞冻存的基本原理:细胞代谢过程需要各种蛋白酶的参与,而这些蛋白酶在环境温度低于-70℃时会集体不工作,低温贮藏的目的是通过较低温使细胞代谢活动近乎停止。细胞因此进入休眠状态,使细胞“不会老”,所以可以长期保存。因为冻融过程对所有细胞和组织都是有一定伤害的,因此,需要开发出有效的技术来防止细胞死亡和损伤。低温保护剂可保护细胞不受细胞内冰冻影响,目前多采用DMSO,甘油,乙二醇和丙二醇等渗透型低温保护剂。它们的作用机制包括:自由进入细胞,取代水,使冰点下降,充当盐的二次溶剂,提高细胞膜对水的通透性。
无血清细胞冻存液,通用于各种动物细胞株。特别配方具有有效提高细胞冻存活率和复苏活力。不含动物来源性蛋白,能减少各类细菌、霉菌和支原体等的污染,确保冻存细胞安全。既适用于一般培养细胞的冻存,也适用于无血清培养细胞和蛋白表达细胞的冻存。高安全性,完全使用医药品等级原料进行生产,不含动物成分,细菌、霉菌和支原体等污染可能性低,各批产品之间有更高的产品质量一致性。2.细胞存活率高,无批次差异。3.完全冻存液配方,可直接使用,方便简捷,可直接存放于-80℃冰箱冻存,无需经过费时的程序降温过程(省时、省力、省钱)。无血清细胞,无血清干细胞及MSC冻存液储存于4℃以下。质量保障期从产品的生产日期起,为期3年。3个月以上没有使用冻存液计划时,尽可能冷冻保存。为避免重复冻融过程可能导致的冻存液品质下降和性能降低,推荐将100 ml产品分装小瓶后,再存放于4℃以下或-20℃冰箱冻存。无血清冻存液特性:复苏细胞存活率高。
无血清细胞冻存液复苏细胞实验步骤:1.从冰箱里取出细胞冷冻保存管,立即放入37℃振动水浴槽中快速解冻。2.待冻存管中细胞混合液完全融化后,立即加入1 ml细胞培养基于该冷冻管中与细胞混合,再将细胞混合液从冻存管中移入含有9 ml该细胞培养基的试管中,混合均匀。3.离心收集培养细胞(参考离心条件:1,000~2,000 rpm,4℃,3~5 min),移去上清液。4.清洗细胞,充分洗净残留冻存液。5.加入适量的新鲜细胞培养基,使用移液管缓缓地均匀细胞混合液。适量地稀释后,将细胞混合液移至事先准备好的培养瓶中。无血清细胞冻存液使用方法:选择冻存处于对数生长期的细胞有助于提高复苏细胞存活率。广州无血清细胞冻存液报价
无血清细胞冻存液存储条件:3个月以上没有使用冻存液计划时,尽可能-20℃冷冻保存。广州无血清细胞冻存液报价
无血清细胞冻存液的使用方法及注意事项:1.将分装好的细胞冻存管,直接置于-80 度冰箱过夜保存,次日投入液氮中保存即可 备注:1、冻存过程中,第2 步在冰袋附近操作时,低温避免保护剂对细胞造成损伤。 2、细胞冻存管一定要保证完全密封,否则在复苏过程中有可能会炸 (1)提前开启水浴锅,温度调节到37(2)将冻存的细胞冷冻管从液氮中取出,迅速置于水浴锅中融化,尽量1min 融化,时间越短,对细胞影响越小。(3)将融化后的含细胞的冷冻保存液迅速析出置于新鲜培养基中充 分混匀,(如细胞冷冻保存液为500ul,则加入到5ml 新鲜培养基中, 如细胞冷冻保存液位1ml,则加入10ml 新鲜培养基中。)(4)混匀后立即离心,800 转,3min 即可离心结束后弃上清,加入预温的新鲜培养液。(5)混匀后分瓶置于二氧化碳培养箱中培养。(二氧化碳浓度根据培 养基要求决定,通常为5%【注意事项】细胞系 冻存密度 备注 正常人成纤维细胞 1~310 cells/ml杂交瘤细胞 1~310 cells/ml某些hybridoma 会因冷冻浓度 太高而在解冻24小时后死去。广州无血清细胞冻存液报价