详细步骤如下:1.75%酒精浸泡大鼠尾巴30min;2.将尾巴剪开、去掉皮毛,并剪成小段(3cm左右),抽出银色的尾键;3.把剪碎的尾键置于150ml,0.1%消过毒的醋酸中,4℃放置,并不时振荡;4.48h后取上清,4000转离心30min后,取上清;5.分装上清(鼠尾胶)4度(或-20度)保存。有时可继续向4。中沉淀中加入10-20ml醋酸,重复以上步骤,以制备更多的鼠尾胶。在使用时,先将冰存的胶原液在室温下解冻,再按以下步骤包被培养器皿:1)用吸管吸取胶原液,在无菌的培养器皿的生长面内壁上均匀地涂上薄薄的一层胶原溶液。2)若包被的是培养瓶,可向培养瓶通入氨气或用浸有氨水的棉球封口片刻。让氨气充入瓶内后,即可旋紧瓶盖或塞紧瓶塞。若为培养皿或板的话,可将培养皿或板放在已消毒的饭盒内,将浸有氨水的棉球放入饭盒内,盖紧饭盒盖,四周用封口胶封死。按照6-10ug/cm2的浓度包被培养瓶。在室温或37度结合数小时或者2-8度过夜。南昌鼠尾胶原生产厂家
鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事项:将培养器皿在室温(25 度左右)下 放置 20 分钟待胶凝固后,转移到培养箱内。如果配制中使用的是 10PBS, 使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。 B.含细胞的三维胶原的制备(以配制 200ul鼠尾胶原蛋白(5mg/ml)加到(如果反过来把12ul 0.1mol/L NaOH 加到胶原溶液中,会由于 NaOH 不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即 混匀。再加入 23ul 10PBS 10培养液,混匀(混匀后pH 左右,如果 PBS 或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用 pH 试纸测试)。加入 760ul 的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放 20分钟待胶凝固后,加入适当体积的细胞培养液,转移到培养箱中培养。 注意事项:在室温下pH 中性时可迅速成胶,在操作过程中要 尽量保持低温。济南正规鼠尾胶原服务电话鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验长时程的记录。
鼠尾胶原胶凝程序:胶原蛋白I按以下步骤使其pH达到碱性时凝胶。1)将无菌5cm左右的纱布海绵贴在150mm培养皿的盖子上来制备氨蒸气室。用氢氧化铵使纱布饱和,把盖子放在150mm的培养皿上,暂放置一边。2)将胶原蛋白I均匀涂布在要包被物的表面上,厚度可以根据需要改变,胶原蛋白I(50-100μL)足以涂覆22mm的盖玻片。 对于直径100mm的培养皿,每个加入约6mL; 对于60mm培养皿添加约2.3mL,对于35mm培养皿添加约1mL。3)将涂有胶原蛋白的盖玻片或带有盖子的培养皿转移到氨蒸气室并暴露三分钟。4)在无菌蒸馏水中(35mm培养皿加5mL,60mm培养皿加10mL等)浸泡涂布的盖玻片或培养皿30min。吸取原蒸馏水并加0.5-1.0mL无菌蒸馏水,放置在层流罩中过夜。5)吸出蒸馏水,用含血清的平衡盐缓冲液溶液代替并保存在2-8°C。
生物医用鼠尾胶原蛋白的提取方法,采用酸法与酶法相结合的工艺,保持恒低温无菌的环境,利用同样浓度的盐溶液进行两次盐析与离心,简化了提纯步骤。所用酸为低浓度酸溶液,并采用柠檬酸替代醋酸进行提纯。从提取原料到样品生成过程中,进行多次真空冷冻干燥,并经进一步处理获得含水率在3%以下的胶原蛋白微粉;较后由灭菌、无菌包装,成品胶原蛋白粉末的纯度在98%以上。本发明获得的胶原蛋白降低了蛋白的免疫原性,提高了产率和生物相容性,降低了成本,适用于生物医用材料,所得到的胶原蛋白能完整地保留其特有的三股螺旋结构。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三个月以上的时间。
鼠尾胶原蛋白的获取也相当“讲究”,首先要以无毒方法捕到家鼠。取尾长20cm以上者,齐尾根部切下尾巴,洗净后浸于75%酒精中。在无菌操作下剥去鼠尾皮肤,即可见附于鼠尾骨上的4束韧带。每束韧带中,位于外面及近骨一面的为白色纤维,较光洁,微发亮。纤维之间为易碎裂的间质。而剥去下来的“纤维”,就放置在嘉兴眼库中,以供需要时及时提取。让小小的老鼠尾巴发挥其神奇的作用,以医学人严谨、踏实、不断进取的医学态度,让鼠尾胶原蛋白帮助更多的人,恢复角膜的光明,重现光明的世界。I型胶原蛋白(Collagen, Type I)结构上是由2个α1链和1个α2链组成的异源多聚体。厦门武汉鼠尾胶原
鼠尾胶原醋酸溶解:建议将溶液转移到拧口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底铺上一层氯仿。南昌鼠尾胶原生产厂家
鼠尾胶原蛋白的用途是什么:在工业应用方面,鼠尾胶原蛋白用于培养容器等实验室设备的内部涂层。设备上的胶原蛋白薄层通常被允许干燥。它还可以用来制造一种凝胶,可当作悬浮细胞的培养基。此外,还可以把它当胶水使用。在化妆品行业,鼠尾胶原蛋白可当作沐浴液和肥皂中的凝胶。它还用于生产能减少皱纹和改善皮肤质量的面霜或护肤霜。不过,用于抚纹,或使嘴唇显得更大更饱满的注射用胶原蛋白通常是从牛或猪提取。不过,用于抚纹,或使嘴唇显得更大更饱满的注射用胶原蛋白通常是从牛或猪提取。南昌鼠尾胶原生产厂家
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