鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事项:将培养器皿在室温(25度左右)下放置20分钟待胶凝固后,转移到培养箱内。如果配制中使用的是10PBS,使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。B.含细胞的三维胶原的制备(以配制200ul鼠尾胶原蛋白(5mg/ml)加到(如果反过来把12ul0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入23ul10PBS10培养液,混匀(混匀后pH左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用pH试纸测试)。加入760ul的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放20分钟待胶凝固后,加入适当体积的细胞培养液,转移到培养箱中培养。注意事项:在室温下pH中性时可迅速成胶,在操作过程中要尽量保持低温。鼠尾胶原、多聚赖氨酸和明胶3种基质对体外培养角膜上皮细胞增殖的影响。开封正规鼠尾胶原哪家便宜
一种基于鼠尾胶原蛋白制备的可吸收止血材料及其制备方法:随着现代医学的发展,各种医用耗材的更新换代也是日新月异。止血材料是常见的医疗器械产品。但是现今市面上的止血材料不光存在着容易引起伤口传染的缺点;同时还存在着容易与伤口粘附不易去除,导致伤口溃烂,或者因为粘附导致传染;再次就是止血材料多是通过吸收血液及添加凝血酶等外在因素止血,很少有止血材料是使用能够自身具有止血性质的材料来生产的。现今市面上的可吸收止血材料有氧化纤维素、α-氰基丙烯酸酯类组织胶、医用止血明胶等,但是都有各自的缺点。如氧化纤维素可引起组织周围PH值升高;α-氰基丙烯酸酯类组织胶降解过程中释放出氰和甲醛等有毒物质;医用止血明胶黏附性较差,易脱落,因其吸收血液后膨胀可能压迫伤口周围组织等。唐山正规鼠尾胶原哪里买注意事项:在室温下pH 中性时可迅速成胶,在操作过程中要 尽量保持低温。
鼠尾Ⅰ型胶原:组装液的配置:1.50mmol/L甘氨酸+200mmol/L氯化钾100mL,用1mol/L氢氧化钠调节酸碱度至9.2。2.胶原纤维的重构吸取胶原10μL至小培养皿中,倒入0.5mL自组装液,室温放置20min。予自组装液自组装24h。吸取0.05%戊二醛2mL至小培养皿中,将自组装24h的胶原浸泡在戊二醛中。然后将胶原经去离子水、50%乙醇、100%乙醇依次漂洗后进行TEM观察。3.生物矿化形成仿生骨材料静滴配置钙磷矿化液将25mL钙液(10mmol/L二水氯化钙+150mmol/L氯化钠+50mmol/L三羟甲基氨基甲烷+0.02%三氮化钠)倒入烧杯中,滴入聚丙烯(PAA)至浓度350μg/mL;滴加1mol/L的氯化氢,调节酸碱度至7.4,然后缓慢滴入25mL磷液(6mmol/L磷酸氢二钠),约16滴/min。
三维胶原的制备:鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/ml以上,pH7左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度1-2mg/ml。胶原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,在成胶过程中需要加入0.06X体积的0.1mol/LNaOH来中和。需要的溶液(均需要无菌、预冷):10xPBS(可含10mg/L的酚红用于pH指示)或10x培养液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),双蒸水A.不含细胞的三维胶原的制备(以配制1毫升,1mg/ml三维胶为例):将200ul鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的离心管中,加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反过来把12ul0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。加入适当体积的细胞培养液,转移到培养箱中培养。
胶原蛋白的提取方法:酶法提取:酶法提取是利用蛋白酶使胶原溶解,水解条件温和,反应速率快,提取的胶原蛋白仍有完整的三股螺旋结构,蛋白纯度高,理化性质稳定,且无环境污染。酶法提取常用的蛋白酶有:胃蛋白酶、胰蛋白酶或者复合酶。工艺可选择一步法,即利用酶液直接提取;二步法,即先用酸或者碱进行初步提取,然后再用酶提取。Langmaier等[6]用MgO预处理革屑,然后用碱性蛋白酶提取胶原的水解产物。CabezaL.F.T等[7]先用胃蛋白酶,再用碱性蛋白酶提取了2种不同的胶原水解产物。赵苍碧等[2]采用胃蛋白酶和无花果蛋白酶消化法从牛腱中提取胶原蛋白,探讨了酶和酶的加入量对提取结果的影响,给出了酶对胶原提取较佳工艺配比,酶与牛腱的质量比为0.1时效果较佳,而使用无花果蛋白酶时,0.01的配比较佳。我们不建议用过滤的方法无菌化。已经发现该方法会导致丢失蛋白。成都正规鼠尾胶原厂家批发价
在室温中搅拌1-3小时直到完全溶解。开封正规鼠尾胶原哪家便宜
鼠尾胶原是一种天然培养基,它具有促进体外培养细胞(特别是上皮细胞)贴壁的作用,同时它也是一种天然的黏附剂,当我们需要在培养瓶或培养皿内放置小玻片,制备细胞爬片时,可在瓶底涂一层胶原,再放上小玻片,自然干燥后小玻片就固定于培养瓶之中。通过本实验可掌握鼠尾胶原的制备方法,以及如何切割小玻片,并利用鼠尾胶原将其固定于培养瓶内。实验设备及材料:大鼠尾巴、剪刀、镊子、止血钳、弯头吸管、平皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、天平、生理盐水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、盖玻片、培养瓶、钻石笔、鼠尾胶原。实验内容:1、制备鼠尾胶原。2、切割小玻片。3、利用鼠尾胶原将小玻片固定于培养瓶内。开封正规鼠尾胶原哪家便宜